雷帕霉素-CD96免疫膠束的制備及表征與靶向性初步分析.pdf

1、目的：制備雷帕霉素-CD96免疫膠束并對(duì)其進(jìn)行表征分析，體外探討免疫膠束對(duì)HL-60細(xì)胞的靶向特異性。
　　方法：比較成膜法和溶劑蒸發(fā)法制備膠束的優(yōu)劣；采用正交設(shè)計(jì)對(duì)制備處方進(jìn)行優(yōu)化，篩選出最佳制備工藝；動(dòng)態(tài)激光散射儀檢測(cè)徑粒、分布和zeta電位；芘熒光探針光譜法測(cè)定臨界膠束濃度；紫外分光光度法測(cè)定載藥膠束的包封率和載藥量，并考察此法測(cè)定雷帕霉素含量的精密度和適用性。在篩選出載藥膠束最佳制備工藝的基礎(chǔ)上，將CD96單抗與Mal-P

2、EG-DSPE和載藥膠束相連接，制備雷帕霉素-CD96免疫膠束；將制備好的空白膠束、載藥膠束、免疫載藥膠束置于4℃條件下冷藏保存，每隔一段時(shí)間重新測(cè)量一次粒徑、zeta電位和包封率，觀察膠束溶液的穩(wěn)定性；通過WST-8法測(cè)定3種膠束對(duì)急性髓系白血病HL-60細(xì)胞的殺傷作用，初步分析其靶向特異性。
　　結(jié)果：成膜法制備的膠束粒徑較大且分布不均一，呈多峰分布，粒徑在413nm左右。而溶劑蒸發(fā)法制備的膠束粒徑分布窄，分散性好。溶劑蒸發(fā)法

3、制備的空白膠束、載藥膠束、免疫載藥膠束的平均粒徑分別為62.8、78.2和103.1nm，zeta電位分別為-15.8、-20.2和-20.6mv。因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)采用溶劑蒸發(fā)法制備膠束。正交試驗(yàn)篩選出的最佳處方是有機(jī)相/水相體積比為1:10，藥物和嵌段材料質(zhì)量比為1:10，藥物在有機(jī)溶劑中的濃度為1mg/mL，水相（PBS）pH值為7，即二氯甲烷1mL、PBS10mL、PBS的pH=7、雷帕霉素1mg、mPEG-PLA10mg。芘熒光探

4、針法測(cè)得臨界膠束濃度為3.16mg/L，紫外分光光度法測(cè)得包封率為51.3％，載藥量為5.13%，此法的精密度和加樣回收率符合驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。3種膠束在4℃條件下保存穩(wěn)定性良好。WST-8結(jié)果顯示細(xì)胞處理24小時(shí)后，藥物濃度為0.01μg/mL時(shí)對(duì)細(xì)胞的毒性無顯著性差異，但當(dāng)濃度高于0.1μg/mL時(shí)雷帕霉素-CD96免疫膠束組和雷帕霉素膠束組對(duì)細(xì)胞的毒性作用均強(qiáng)于雷帕霉素溶液組（P<0.05），且免疫膠束組與相對(duì)應(yīng)濃度的普通膠束組相比亦有顯

5、著性差異（P<0.05）。細(xì)胞處理48小時(shí)后，從濃度0.01μg/mL開始，3種藥物即對(duì)HL-60細(xì)胞有殺傷作用，效應(yīng)趨勢(shì)與24小時(shí)時(shí)相同。
　　結(jié)論：
　　1.采用溶劑蒸發(fā)法成功制備了膠束、雷帕霉素膠束和雷帕霉素-CD96免疫膠束，并篩選出最優(yōu)處方。
　　2．分析了雷帕霉素膠束和雷帕霉素-CD96免疫膠束的表征和穩(wěn)定性。
　　3．雷帕霉素膠束和雷帕霉素-CD96免疫膠束具有靶向性，免疫載藥膠束的主動(dòng)靶向性更強(qiáng)。