連萸降壓膠囊對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠降壓機(jī)制的血清蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的:
　　 實(shí)驗(yàn)研究表明,黃連、吳茱萸能改善自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)的心功能指標(biāo),抑制SHR血管壁重塑。本研究通過(guò)對(duì)服用連萸降壓膠囊的SHR血壓的觀測(cè),以明確該藥的降壓作用,并對(duì)SHR血清運(yùn)用雙向凝膠電泳(2-DE)及質(zhì)譜技術(shù),建立蛋白質(zhì)差異表達(dá)譜,分析連萸降壓膠囊治療SHR后差異蛋白表達(dá)變化,探討該藥治療高血壓的降壓機(jī)制,為該藥治療高血壓病提供相關(guān)的科學(xué)依據(jù),探討中藥降壓的靶蛋白質(zhì)分子,豐富中醫(yī)藥治療高血壓的基礎(chǔ)及臨床研究

2、內(nèi)容,為中醫(yī)藥臨床推廣應(yīng)用提供理論和科學(xué)依據(jù)。
　　 方法:
　　 本實(shí)驗(yàn)以12周齡SHR和正常大鼠為研究對(duì)象,將30只SHR隨機(jī)分為模型組、連萸降壓膠囊組(中藥組)、奧美沙坦酯組(西藥組),10只正常大鼠為對(duì)照組,共4組,每組雌雄各半。正常組和模型組予以0.9％生理鹽水10ml/kg·d灌胃,中藥組按黃連素240mg/kg·d+吳茱萸次堿80mg/kg·d的劑量配制混懸液,以10ml/kg·d灌胃,西藥組按奧美沙坦酯1

3、0mg/kg·d劑量配制混懸液,以10ml/kg·d灌胃,四組均每天灌胃一次,連續(xù)灌胃4周。第四周末所有大鼠在麻醉狀態(tài)下,用頸部插管測(cè)量左頸動(dòng)脈血壓,并抽取主動(dòng)脈血,混勻低溫離心(2500rpm,4℃),分離出血漿,取血清置于聚丙乙烯塑料試管中,所有樣本均于-80℃低溫冰箱中保存。蛋白質(zhì)組學(xué)分析實(shí)驗(yàn),首先采用Bradford法測(cè)蛋白含量,應(yīng)用(2-DE)技術(shù)分離蛋白質(zhì),凝膠染色(銀染法),用掃描儀獲取正常對(duì)照組、模型組、中藥組、西藥組蛋

4、白質(zhì)雙向凝膠圖譜。應(yīng)用Imagemaster凝膠圖像分析軟件,尋找樣品的差異表達(dá)蛋白點(diǎn)。選取差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn),利用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF—MS)測(cè)定肽質(zhì)量指紋圖譜(PMF),數(shù)據(jù)庫(kù)檢索鑒定各肽段對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì),獲取差異表達(dá)蛋白質(zhì)的信息。
　　 結(jié)果:
　　 1.連萸降壓膠囊對(duì)SHR頸動(dòng)脈血壓的影響:與模型組比較,西藥組與中藥組的SHR動(dòng)脈血壓均明顯降低(P<0.01)。
　　 2.成

5、功構(gòu)建四組血清蛋白質(zhì)雙向凝膠電泳圖譜。分析四組大鼠血清蛋白質(zhì)表達(dá)譜,發(fā)現(xiàn)共有顯著差異點(diǎn)11個(gè),與正常組比較,模型組表達(dá)降低的有7個(gè),表達(dá)增強(qiáng)的有3個(gè)；中藥組除上述表達(dá)變化外,新增加1個(gè)差異蛋白點(diǎn)。
　　 3.連萸降壓膠囊及奧美沙坦酯干預(yù)后,表達(dá)降低的7個(gè)差異點(diǎn),均出現(xiàn)不同程度表達(dá)上調(diào),接近正常組水平；表達(dá)增強(qiáng)的3個(gè)差異點(diǎn),均出現(xiàn)不同程度表達(dá)下調(diào)接近正常組水平；此外,連萸降壓膠囊干預(yù)后新增加1個(gè)差異蛋白點(diǎn)。
　　 4.11

6、個(gè)差異蛋白點(diǎn)通過(guò)膠內(nèi)酶消化、質(zhì)譜鑒定和數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索,共鑒定出6個(gè)蛋白點(diǎn),另外5個(gè)蛋白點(diǎn)由于沒(méi)有得到令人滿意的肽質(zhì)量指紋圖譜或搜索數(shù)據(jù)庫(kù)時(shí)不能得到可信度較高的結(jié)果而未能鑒定。鑒定蛋白有:E3泛素連接酶、線粒體膜蛋白、鋅脂蛋白、Rho GTPase、T細(xì)胞受體、假想蛋白。這些蛋白功能涉及細(xì)胞代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、電子傳遞、細(xì)胞骨架等。
　　 結(jié)論:
　　 1、連萸降壓膠囊可降低SHR的動(dòng)脈血壓。
　　 2.利用雙向凝膠電泳

7、及其分析軟件證實(shí),與正常組比較,模型組有10個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn),表達(dá)降低的有7個(gè),表達(dá)增強(qiáng)的有3個(gè)；中藥組除上述變化外,新增一個(gè)差異蛋白點(diǎn)。
　　 3.11個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn),利用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI—TOF-MS)測(cè)定肽質(zhì)量指紋圖譜(PMF),鑒定各肽段對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì),獲取6個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)的信息。
　　 4.連萸降壓膠囊及奧美沙坦酯作用于SHR后,血清蛋白表達(dá)發(fā)生了明顯變化,原來(lái)表達(dá)下調(diào)的線粒體膜蛋白、