HIF-1α促進甲狀腺乳頭狀癌和未分化癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機制研究.pdf

1、目的：研究低氧誘導因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)對甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺未分化癌侵襲轉(zhuǎn)移的影響，并初步探討HIF-1α及其下游分子蛋白鋅指轉(zhuǎn)錄因子(Snail)、上皮細胞鈣粘蛋白（E-cadherin）、間質(zhì)細胞波形蛋白(Vimentin)和基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)在其中的作用及相關(guān)性。
　　方法：用5％ O2的低氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)甲狀腺未分化癌FRO細胞不同時間（0h、2h、4h

2、、8h和12h），在倒置顯微鏡下觀察其細胞形態(tài)的改變，用Western blotting法檢測各組細胞中HIF-1僅、Snail、E-cadherin、Vimentin、MMP2的蛋白表達;將FRO細胞分為正常氧組、YC-1+常氧組、低氧組、YC-1+低氧組和常氧+CoCl2組，用Western blotting法檢測各組中HIF-1α、Snail、E-cadherin、Vimentin和MMP2蛋白的表達;用Transwell侵襲和遷

3、移實驗檢測以上5組中細胞侵襲和遷移能力的變化。用免疫組化SP法，檢測83例人甲狀腺乳頭狀癌組織中HIF-1α、Snail、E-cadherin和MMP2的表達情況;將甲狀腺乳頭狀癌NPA細胞在5％O2的低氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h后，用Western blotting方法檢測其HIF-1α、Snail、E-cadherin和MMP2的表達;用Transwell侵襲實驗檢測低氧處理12h組與常氧組NPA細胞侵襲能力的改變。
　　結(jié)果：隨著

4、低氧處理時間的延長，可觀察到FRO細胞逐漸發(fā)生間質(zhì)樣細胞的改變; HIF-1α、Snail、Vimentin和MMP2的蛋白表達呈時間依賴性增高，低氧處理12h達到最高，且低氧12h組較0h組顯著增多(P＜0.01);上皮細胞特征性蛋白E-cadherin的表達量持續(xù)減少(P＜0.01);低氧組和常氧+CoCl2組中FRO細胞HIF-1α、Snail、Vimentin、MMP2蛋白表達水平較對照組明顯增多（P＜0.05），E-cadhe

5、rin表達則明顯減少（P＜0.05）;低氧組和常氧+CoCl2組轉(zhuǎn)移和遷移細胞數(shù)較對照組均顯著增多(P＜0.01)。在83例甲狀腺乳頭狀癌組織中，HIF-1α、Snail、E-cadherin和MMP2的陽性率分別為71.08％(59/83)、66.27％(55/83)、44.58％(37/83)和口73.49％(61/83);HIF-1α、Snail、E-cadherin和MMP2的表達與腫瘤直徑和年齡無關(guān)，與TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相

6、關(guān)(P＜0.05); HIF-1α與Snail呈正相關(guān)(r=0.276 P＜0.05)，Snail與E-cadherin呈負相關(guān)(r=-0.431 P＜0.01)，HIF-1α和Snail分別與MMP2均呈顯著正相關(guān)(r=0.368 P＜0.01; r=0.220 P＜0.05);NPA細胞經(jīng)過5％O2的低氧處理12h后，其HIF-1α、Snail和MMP2的表達較常氧組顯著增多（P＜0.01），E-cadherin表達較常氧組減少（P

7、＜0.05）;NPA細胞低氧組較常氧組細胞侵襲能力顯著增強。
　　結(jié)論：在5％O2低氧條件下，HIF-1α在甲狀腺乳頭狀癌NPA細胞和甲狀腺未分化癌FRO細胞中表達增多，并且促進NPA細胞和FRO細胞侵襲和轉(zhuǎn)移，其分子機制可能是HIF-1α上調(diào)Snail、Vimentin和MMP2的表達，下調(diào)E-cadherin的表達。甲狀腺乳頭狀癌組織中HIF-1α、Snail、MMP2和E-cadherin的表達與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，推測H