GPER1介導(dǎo)雌激素促進(jìn)甲狀腺乳頭狀癌增殖和侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)旨在研究G蛋白偶聯(lián)雌激素受體1(Gprotein-coupled estrogen receptor1,GPER1)在雌激素促進(jìn)甲狀腺乳頭狀癌(Papillary thyroid carcinoma,PTC)增生和侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及其下游信號(hào)通路，探討雌激素通過GPER1介導(dǎo)促進(jìn)PTC增殖和侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。
　　方法：采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)68例PTC患者組織中GPER1的表達(dá)及其與臨床病理指針的關(guān)系，同時(shí)檢測(cè)

2、PTC組織中EGFR及CXCR1的表達(dá)，研究其三者表達(dá)的相關(guān)性。Western blot和RT-PCR方法檢測(cè)PTC細(xì)胞株BCPAP和K-1細(xì)胞中GPER1的表達(dá)；分別用E2、ER抑制劑ICI182780處理甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞，MTT檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞周期相分布；Transwell侵襲轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲遷移能力。分別用E2、GPER1激動(dòng)劑G1及E2+GPER1抑制劑G15處理K-1細(xì)胞，Western b

3、lot檢測(cè)ERK1/2、AKT磷酸化水平以及NF-κB的核轉(zhuǎn)位ELISA方法檢測(cè)IL-8的分泌水平。
　　結(jié)果：在68例PTC組織中，GPER1及EGFR、CXCR1的表達(dá)陽(yáng)性率分別為76.5％、66.2%、64.7%，明顯高于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組(P<0.01)；三者在PTC中的表達(dá)與患者頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，與其他臨床病理特征(年齡、性別、腫瘤大小及TNM分期)則無相關(guān)性(P>0.05)。在PTC及PTC淋巴轉(zhuǎn)移癌組

4、織中，GPER1與EGFR的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(rs=0.262，P=0.031；rs=0.542，P=0.002)、GPER1與CXCR1的表達(dá)也呈顯著正相關(guān)(rs=0.276，P=0.025；rs=0.483，P=0.006)。PTC細(xì)胞株BCPAP同時(shí)表達(dá)ERα和GPER1，而K-1幾乎不表達(dá)ERα，僅表達(dá)GPER1。設(shè)不同濃度E2(0、10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L)處理BCPAP細(xì)胞24h，MTT法檢

5、測(cè)各組細(xì)胞增殖率分別為0、(13.5±1.5)%、(20.6±1.9)%、(11.3±1.2)%(P<0.05)；用10-8 mol/L的E2分別處理不同時(shí)間(0、12h、24h)，各組細(xì)胞增殖率分別為0、(12.0±1.4)%、(20.6±1.9)%(P<0.05)。E2和E2+ICI182780(10μmol/L)處理K-1細(xì)胞24h，與對(duì)照組相比，細(xì)胞增殖率分別為(19.7±0.9)%、(18.4±1.6)%(P<0.05)；G1

6、期細(xì)胞比例減少，S/G2期細(xì)胞比例增加；侵襲與遷移細(xì)胞數(shù)均增加(P<0.05)。用E2處理K-1不同時(shí)間(0、5min、10min、15min、30min)，ERK1/2、AKT磷酸化水平在5min開始增高，10-15min最高；10-8mol/L的E2處理K-1不同時(shí)間(0、1h、2h、4h、8h)，1h時(shí)發(fā)生NF-κB核轉(zhuǎn)位，4h最為明顯；用E2、G1(10nmol/L)及 E2+G15(100nmol/L)分別處理K-1細(xì)胞不同時(shí)