苦丁茶抑菌活性及其紅外譜效關(guān)系研究.pdf

1、目的：本課題以廣西苦丁茶作為研究對(duì)象，考察苦丁茶不同極性部位對(duì)革蘭氏陰性菌、陽(yáng)性菌的抑制作用，確定苦丁茶抑菌活性的藥效部位，為研究苦丁茶抑菌活性成分提供依據(jù)；利用響應(yīng)面分析法，以苦丁茶水提物抑菌活性為指標(biāo)，對(duì)苦丁茶水提物的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化；研究苦丁茶中抑菌活性成分不同采收月份的動(dòng)態(tài)累積規(guī)律，為確定適宜的采收期、合理開發(fā)利用其植物資源提供科學(xué)依據(jù)；同時(shí)將苦丁茶紅外指紋圖譜與抑菌活性之間的譜效關(guān)系，以闡明相關(guān)物質(zhì)基礎(chǔ)，建立一種操作簡(jiǎn)便、客

2、觀有效的評(píng)價(jià)苦丁茶內(nèi)在質(zhì)量的新模式。
　　方法：(1)采用系統(tǒng)溶劑提取法得到7個(gè)不同極性部位，通過96孔板測(cè)定不同極性部位的最低抑菌濃度（MIC），杯碟法測(cè)定其抑菌圈直徑，并通過HPLC分別測(cè)定其中槲皮素、山柰素含量，苯酚硫酸法測(cè)定多糖含量，分析3種物質(zhì)含量與抑菌能力之間的關(guān)系，并確定苦丁茶抑菌活性物質(zhì)的提取方法。(2)在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，選擇提取溫度、提取時(shí)間和液料比三因素為自變量，以杯碟法測(cè)定苦丁茶水提物對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄

3、球菌、綠膿桿菌的抑菌圈直徑為響應(yīng)值，根據(jù)中心組合(Box-Behnken)試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,采用三因素三水平的響應(yīng)面分析法優(yōu)化苦丁茶抑菌活性成分提取工藝研究。(3)不同采收期的苦丁茶葉水浴回流提取3次，用杯碟法分別測(cè)定其對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌3種菌的抑菌圈直徑，比較不同采收期苦丁茶水提物抑菌圈直徑大小，確定最佳采收期，通過苯酚硫酸法測(cè)定不同采收期苦丁茶提取物中多糖含量，分析多糖含量與苦丁茶抑菌能力之間相關(guān)性。(4)采用近紅外漫

4、反射光譜技術(shù)，以不同產(chǎn)地苦丁茶為樣本，建立不同產(chǎn)地苦丁茶水提物的紅外指紋圖譜庫(kù)，并測(cè)定苦丁茶水提物對(duì)革蘭氏陰性菌、革蘭氏陰性菌的抑菌活性，運(yùn)用數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法將藥理數(shù)據(jù)與紅外指紋圖譜進(jìn)行相關(guān)性研究，建立相關(guān)性回歸模型。
　　結(jié)果：(1)不同極性部位抑菌結(jié)果顯示石油醚無抑菌活性，氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取物抑菌活性中等，乙醇、甲醇抑菌活性強(qiáng)，水提取物的抑菌活性最強(qiáng)。通過3種物質(zhì)含量與苦丁茶抑菌能力之間相關(guān)性比較推測(cè)槲皮素、多糖類為苦丁茶

5、抑菌活性成分。(2)苦丁茶水提物中抑菌活性成分提取的最佳工藝條件為︰回流提取、提取溫度98℃、提取時(shí)間2.4h、料液比1︰60 g·mL-1。在此條件下提取液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌的抑菌圈直徑達(dá)20.37mm、24.83mm、29.35mm。(3)在一年的不同月份生長(zhǎng)期內(nèi)，苦丁茶水提物對(duì)3種菌的抑制作用均有顯著性差異，4月份苦丁茶水提物對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌的抑菌圈直徑為全年最大值，12月份苦丁茶水提物的抑菌

6、圈直徑為全年最小值?？喽〔枰志钚猿煞?月份含量最高，為最佳采收期。苷類和多糖為苦丁茶抑菌活性成分。(4)采用后退法建立多元線性回歸方程，紅外光譜中19個(gè)指紋峰，有15個(gè)對(duì)大腸桿菌的關(guān)系方程有顯著貢獻(xiàn)（P<0.05），大腸桿菌的譜效關(guān)系式為：Y=-111.436-144.584 X1+97.856 X3+96.027 X4+64.34 X5－83.72 X6-118.229 X7＋141.886 X8-25.663 X9-12.12 X

7、10+19.58 X11－12.098 X12＋33.067 X13+31.289 X15+46.206 X16(P<0.05, R=0.952)有11個(gè)對(duì)金黃色葡萄球菌的關(guān)系方程有顯著貢獻(xiàn)，金黃色葡萄球菌的譜效關(guān)系式為：Y=24.862－72.355 X1＋168.465 X3-75.447 X7+132.753 X8－15.572 X12+53.171 X13＋14.905 X14+37.644 X15+48.743 X16+3.3

8、35 X17+18.88 X19(P<0.05,R=0.926)有12個(gè)對(duì)綠膿桿菌的關(guān)系方程有顯著貢獻(xiàn)，綠膿桿菌的譜效關(guān)系為：Y=137.561-315.929X2+400.182X3-157.634X5－30.459X6＋72.051X8＋5.023 X10－30.016 X11－53.736X12＋162.242X13－146.465X14(P<0.05, R=0.952)經(jīng)過7批藥材驗(yàn)證，譜效關(guān)系模型的預(yù)測(cè)值和實(shí)際值的偏差率不超過