BMP-2和HGF基因修飾的自體MSCs促進腱骨愈合的研究.pdf

1、目的：探討骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）和肝細胞生長因子（HGF）基因修飾的兔骨髓間充質(zhì)干細胞對前交叉韌帶重建術后腱骨愈合的促進作用。
　　方法：①于兔雙側髂嵴處抽取骨髓血，分離和培養(yǎng)兔骨髓MSCs,并對獲取的細胞進行鑒定；以攜帶骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（BMP-2）基因的重組腺病毒和攜帶肝細胞生長因子（HGF）基因的重組腺病毒修飾兔骨髓MSCs,檢測轉染效率和目的蛋白的表達水平，并觀察基因修飾對MSCs表面標志物、分化能力及增殖能力

2、的影響。②將80只成年新西蘭大白兔，隨機分為對照組、MSCs組、MSCs-HGF組和MSCs-BMP2組，顯露并切斷兔正常前交叉韌帶，切取自體趾長伸肌腱重建前交叉韌帶，對照組在每側脛骨的腱骨界面植入100ul纖維蛋白膠，MSCs組注射5×106MSCs+100ul纖維蛋白膠，MSCs-HGF組在界面植入5×106MSCs-HGF+100ul纖維蛋白膠，MSCs-BMP2組在界面植入5×106MSCs-BMP2+100ul纖維蛋白膠。分別

3、在術后4、8、12周取材進行組織學研究，術后12周取材進行生物力學研究，分析評估腱－骨界面的愈合情況。
　　結果：①兔骨髓MSCs分離培養(yǎng)后細胞均一性好、成纖維細胞樣形態(tài)，具有很強的增殖能力，表面特異性抗原CD29、CD44、CD73表達陽性，而CD31、CD45為陰性表達，誘導分化實驗顯示兔骨髓MSCs具有向成骨細胞和脂肪細胞分化的能力。②腺病毒成功轉染兔骨髓MSCs，MOI=150pfu/細胞是較理想的轉染復數(shù)，基因轉染后目的

4、基因持續(xù)表達，48小時表達量最高；目的基因轉染不影響細胞增殖和分化能力、不改變表面標志物。③MSCs-BMP2組術后4周和8周在腱骨界面之間出現(xiàn)軟骨細胞，術后12周腱骨界面呈現(xiàn)肌腱、纖維軟骨、礦化軟骨向骨逐漸過渡；MSCs-HGF組術后4周在腱骨界面出現(xiàn)較多新生血管，術后8周血管逐漸減少，術后12周腱骨結合緊密，腱骨界面可見較多排列有序的膠原纖維。生物力學研究顯示MSCs-BMP2組最大載荷和抗拉剛度均顯著大于其他實驗分組（P<0.05