東北林蛙皮膚活性肽篩選組分抗腫瘤特性分析.pdf

1、目的：已有研究表明兩棲類皮膚活性肽具有廣譜抗病原微生物特性外，還有抗腫瘤活性，且對(duì)正常真核細(xì)胞幾乎無(wú)影響，因而從兩棲類皮膚活性肽中篩選具有抗腫瘤活性的多肽分子，使其成為抗腫瘤藥物候選分子的新來(lái)源具有重要的意義。
　　方法:以兩棲類代表物種東北林蛙（Rana dybowskii）為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，電刺激(5V，20Hz)蛙背部皮膚收集分泌物，優(yōu)化高效液相色譜(HPLC)純化條件，分離純化皮膚分泌物。篩選SAH水解酶活性抑制試驗(yàn)陽(yáng)性的純化肽

2、組分，MTT比色法檢測(cè)其篩選多肽對(duì)人前列腺癌細(xì)胞（PC-3）的存活率，全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)觀察初篩肽組分對(duì)Vero細(xì)胞、PC-3細(xì)胞鉀離子通道的影響。
　　結(jié)果:(1)優(yōu)化了東北林蛙皮膚活性肽HPLC最佳分離純化體系，即流動(dòng)相為乙腈∶甲醇∶水-TFA(9∶1∶90)，流速為0.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為216nm和280nm，洗脫時(shí)間為30-40min。并從蛙皮膚分泌物中獲得14個(gè)肽組分dybowsMiiⅠ～ⅩⅣ。(2)SAH水解酶活

3、性抑制試驗(yàn)顯示dybowskiiⅠ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅺ、ⅩⅣ對(duì)SAH水解酶均呈不同程度抑制。(3)MTT測(cè)定結(jié)果顯示dybowskiiⅠ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、ⅩⅣ隨濃度(0.015、0.03、0.06、0.12μ g/ml)遞增其PC-3細(xì)胞存活率均呈下降趨勢(shì)，尤以0.12μg/ml濃度dybowskiiⅥ最為顯著（降低至40.2％），而dybowskiiⅪ對(duì)PC-3細(xì)胞存活率幾乎無(wú)影響(91.5％)。倒置顯微鏡觀察PC-3細(xì)胞折光性增強(qiáng)、

4、細(xì)胞變圓、脫壁細(xì)胞增多。(4)全細(xì)胞膜片鉗顯示dybowskiiⅥ為0.12ug/ml時(shí)可抑制PC-3細(xì)胞延遲整流鉀離子通道，而對(duì)Vero細(xì)胞無(wú)影響。
　　結(jié)論:(1)建立了東北林蛙皮膚活性肽HPLC分離純化體系，即流動(dòng)相為乙腈∶甲醇∶水-TFA(9∶1∶90)，流速為0.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)216nm和280nm，洗脫時(shí)間30-40min。分離獲得14個(gè)皮膚活性肽組分dybowskiiⅠ～ⅩⅣ。(2)其中，dybowskii