體內(nèi)探討維生素A對結(jié)腸上皮屏障功能的影響.pdf

1、第一部分正常維生素A營養(yǎng)水平促進(jìn)結(jié)腸上皮屏障功能
　　目的：體內(nèi)探討維生素A(VA)對結(jié)腸上皮粘膜屏障功能的影響。
　　方法：建立孕期開始的VA正常（VAN）、VA缺乏（VAD）大鼠模型，并給予VAD生后1天新生大鼠VA補(bǔ)充（VAS）。利用高效液相色譜儀（HPLC）檢測血清中視黃醇水平，Ussing chamber系統(tǒng)檢測大鼠結(jié)腸上皮粘膜跨上皮電阻（TER）的變化，ELISA試劑盒測定大鼠血清二胺氧化酶（DAO）濃度，Rea

2、l-time PCR和Western blot技術(shù)檢測大鼠結(jié)腸上皮粘膜組織中RARβ、TLR4和ZO-2 mRNA和蛋白的表達(dá)水平變化。
　　結(jié)果：VAD組大鼠血清視黃醇水平顯著低于VAN組（P<0.001）；VAN組大鼠結(jié)腸上皮粘膜層的腸上皮電阻明顯高于VAD組（P<0.001），血清DAO水平較VAD組顯著降低（P<0.001），提示孕期開始的VA缺乏可能會(huì)導(dǎo)致生后仔鼠腸道屏障功能下降。而對VAD生后1天新生鼠給予VA干預(yù)后，

3、發(fā)現(xiàn)大鼠血清視黃醇濃度較VAD組顯著提高（P<0.001），與VAN組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。VAS組結(jié)腸跨上皮電阻也明顯高于VAD組（P<0.01），血清DAO水平顯著降低（P<0.001），但均未達(dá)到VAN大鼠正常水平，表明VA補(bǔ)充可有效提高血清視黃醇水平，改善腸道屏障功能。Real-time PCR檢測結(jié)果顯示，VAD組大鼠結(jié)腸上皮粘膜層中的RARβ、TLR4和ZO-2的mRNA表達(dá)水平均較VAN組顯著降低（P<0.05,P<0.001）

4、，而VAS組中上述三種基因的表達(dá)水平均較VAD組明顯增高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.001,P<0.01)。VAN組中的RARβ和TLR4蛋白表達(dá)水平均明顯高于VAD組，但VAS組的上述兩種蛋白表達(dá)水平雖較 VAD組有上升趨勢，卻不能完全恢復(fù)到VAN組的蛋白水平。
　　結(jié)論：孕期開始的VA缺乏可導(dǎo)致生后仔鼠結(jié)腸屏障功能下降，并與結(jié)腸上皮中RARβ信號(hào)、TLR4和緊密連接蛋白ZO-2密切相關(guān)。
　　第二部分孕期開始的VA缺乏降低

5、仔鼠結(jié)腸上皮屏障功能
　　目的：探討LPS感染對孕期開始的VA缺乏（VAD）的仔鼠結(jié)腸上皮屏障功能的影響。
　　方法：給予6周齡的VAN和VAD仔鼠脂多糖（LPS）灌胃誘導(dǎo)腸道感染。高效液相色譜儀（HPLC）檢測血清中的視黃醇濃度；ELISA試劑盒檢測大鼠血清二胺氧化酶（DAO）濃度；采用Real-time PCR和western blot技術(shù)，從蛋白和mRNA水平測定RA受體（RARβ）、Toll樣受體4和緊密連接蛋白ZO

6、-2的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1.VAD組仔鼠血清視黃醇水平較VAN組明顯降低，LPS感染VAN組后血清視黃醇水平下降明顯，但影響血清視黃醇水平的主要因素是VA營養(yǎng)水平（P<0.0001）。
　　2.雙因素分析發(fā)現(xiàn)VA水平與LPS感染均是血清DAO水平的影響因素（P=0.0463和P<0.0001），但LPS是引起DAO濃度升高的主要影響因素（P<0.0001）。
　　3.VAD大鼠結(jié)腸粘膜組織的RARβ、T

7、LR4和ZO-2 mRNA和蛋白表達(dá)水平均較VAN組有顯著性地降低。LPS感染可明顯下調(diào)VAN組結(jié)腸粘膜層中RARβmRNA表達(dá)水平（P<0.05），其表達(dá)受到VA水平及LPS感染交互作用的影響。而通過雙因素分析發(fā)現(xiàn)，LPS感染是大鼠結(jié)腸粘膜組織中TLR4表達(dá)的主要影響因素，VA營養(yǎng)水平是ZO-2表達(dá)的關(guān)鍵影響因子。
　　結(jié)論：孕期開始的VA缺乏降低TLR4表達(dá)水平，減弱仔鼠腸道免疫調(diào)節(jié)能力；下調(diào)ZO-2表達(dá)水平，影響結(jié)腸上皮緊密