LRP16參與宮頸癌放療抵抗的機制研究.pdf

1、LRP16基因是由解放軍總醫(yī)院于1999年克隆的一個人類基因。我們在之前的研究中發(fā)現(xiàn)抑制LRP16的表達可以增加腫瘤細胞對輻射的敏感性，增加輻射誘導的細胞凋亡，但是具體的機制并不明確。近來研究發(fā)現(xiàn)，NF-KB(nuclear factor-kappaB)在許多細胞類型中的高表達被認為是導致腫瘤細胞輻射抵抗的關鍵因素。所以，研究抑制NF-KB的信號轉(zhuǎn)導通路，增強放療療效可作為放療治療癌癥病人的一種新的輔助方法。但是對于電離輻射激活NF-K

2、B的具體分子機制并不完全清楚。本研究探討LRP16可能是參與輻射激活NF-KB通路中的一個關鍵分子。本研究共分2部分。
　　一 LRP16對電離輻射激活NF-KB入核的影響
　　目的：在宮頸癌HeLa細胞中，闡明LRP16對電離輻射激活NF-KB入核的影響。方法：通過免疫熒光技術檢測電離輻射刺激后不同時間點NF-KB的核轉(zhuǎn)位情況；然后分別過表達和抑制LRP16的表達，采Western blot方法檢測NF-KB在核蛋白與漿蛋

3、白中的表達情況，IKB-α總體蛋白水平及磷酸化水平。結(jié)果：電離輻射后1 h，可見NF-KB明顯入核；過表達LRP16可以促進NF-KB入核，提高IKB-α的磷酸化水平，促進IKB-α的降解；反之，抑制LRP16的表達可以抑制NF-KB入核，降低IKB-α的磷酸化水平，阻礙IKB-α的降解。結(jié)論：在宮頸癌HeLa細胞中LRP16可以影響電離輻射誘導NF-KB的入核，該研究對LRP16參與腫瘤細胞產(chǎn)生輻射抵抗現(xiàn)象提供了一種可能的機制。

4、>　　二 LRP16影響電離輻射誘導的NF-KB活性
　　目的：在人類宮頸癌HeLa細胞中，研究LRP16在電離輻射誘導核轉(zhuǎn)錄因子-KB(nuclear factor-KB，NF-KB)激活中的調(diào)控效應及分子機制。方法：分別運用雙熒光素酶分析和Western blot方法檢測LRP16對KB-luc報告基因及NF-KB下游靶基因表達的影響。結(jié)果：雙熒光素酶實驗證實LRP16過表達促進電離輻射誘導的KB-luc活性，而抑制LRP16