LRP16參與宮頸癌放療抵抗的機制研究.pdf

1、LRP16基因是由解放軍總醫(yī)院于1999年克隆的一個人類基因。我們在之前的研究中發(fā)現(xiàn)抑制LRP16的表達(dá)可以增加腫瘤細(xì)胞對輻射的敏感性，增加輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，但是具體的機制并不明確。近來研究發(fā)現(xiàn)，NF-KB(nuclear factor-kappaB)在許多細(xì)胞類型中的高表達(dá)被認(rèn)為是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞輻射抵抗的關(guān)鍵因素。所以，研究抑制NF-KB的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，增強放療療效可作為放療治療癌癥病人的一種新的輔助方法。但是對于電離輻射激活NF-K

2、B的具體分子機制并不完全清楚。本研究探討LRP16可能是參與輻射激活NF-KB通路中的一個關(guān)鍵分子。本研究共分2部分。
　　一 LRP16對電離輻射激活NF-KB入核的影響
　　目的：在宮頸癌HeLa細(xì)胞中，闡明LRP16對電離輻射激活NF-KB入核的影響。方法：通過免疫熒光技術(shù)檢測電離輻射刺激后不同時間點NF-KB的核轉(zhuǎn)位情況；然后分別過表達(dá)和抑制LRP16的表達(dá)，采Western blot方法檢測NF-KB在核蛋白與漿蛋

3、白中的表達(dá)情況，IKB-α總體蛋白水平及磷酸化水平。結(jié)果：電離輻射后1 h，可見NF-KB明顯入核；過表達(dá)LRP16可以促進(jìn)NF-KB入核，提高IKB-α的磷酸化水平，促進(jìn)IKB-α的降解；反之，抑制LRP16的表達(dá)可以抑制NF-KB入核，降低IKB-α的磷酸化水平，阻礙IKB-α的降解。結(jié)論：在宮頸癌HeLa細(xì)胞中LRP16可以影響電離輻射誘導(dǎo)NF-KB的入核，該研究對LRP16參與腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生輻射抵抗現(xiàn)象提供了一種可能的機制。

4、>　　二 LRP16影響電離輻射誘導(dǎo)的NF-KB活性
　　目的：在人類宮頸癌HeLa細(xì)胞中，研究LRP16在電離輻射誘導(dǎo)核轉(zhuǎn)錄因子-KB(nuclear factor-KB，NF-KB)激活中的調(diào)控效應(yīng)及分子機制。方法：分別運用雙熒光素酶分析和Western blot方法檢測LRP16對KB-luc報告基因及NF-KB下游靶基因表達(dá)的影響。結(jié)果：雙熒光素酶實驗證實LRP16過表達(dá)促進(jìn)電離輻射誘導(dǎo)的KB-luc活性，而抑制LRP16