腸外谷氨酰胺補(bǔ)充對(duì)膿毒癥大鼠淋巴器官細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　膿毒癥仍是危重病的重要死亡原因之一，淋巴細(xì)胞凋亡是膿毒癥的重要病理生理機(jī)制之一，本實(shí)驗(yàn)擬研究經(jīng)腸外途徑給予不同劑量的谷氨酰胺對(duì)膿毒癥大鼠淋巴器官細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法：
　　1、隨機(jī)將SD大鼠分成五組：假手術(shù)組（SHAM）、模型組（CLP）、低劑量谷氨酰胺組（L-GLN）、中劑量谷氨酰胺組（M-GLN）、高劑量谷氨酰胺組（H-GLN），采用盲腸結(jié)扎穿孔對(duì)后四組大鼠行膿毒癥模型制備，于術(shù)后立即分別給予尾靜

2、脈注射生理鹽水、0.35g/kg谷氨酰胺、0.5g/kg谷氨酰胺、0.75g/kg谷氨酰胺，同時(shí)為了排除手術(shù)本身產(chǎn)生的影響，對(duì)行假手術(shù)的大鼠尾靜脈注射生理鹽水作為假手術(shù)組。
　　2、觀察記錄各組大鼠術(shù)后的表現(xiàn)，在各組大鼠造模24小時(shí)后于腹腔麻醉下，測(cè)量大鼠肛溫、呼吸、心率，通過頸總動(dòng)脈采血、離心，取血清備用檢測(cè)，同時(shí)隨機(jī)對(duì)各組3只大鼠進(jìn)行頸總動(dòng)脈采血行血培養(yǎng)，取脾臟、胸腺標(biāo)本于10％甲醛固定后，包埋切片做免疫組化。
　　3、

3、原位末端標(biāo)記法（TUNEL）測(cè)胸腺、脾臟的細(xì)胞凋亡，免疫組化測(cè)caspase3、Hsp90在胸腺、脾臟組織中的表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)大鼠血清IgA、IgG、IgM水平及血清TNF-α、IL-10水平。
　　結(jié)果：
　　1、確認(rèn)膿毒癥大鼠動(dòng)物模型成功建立：腹腔麻醉下監(jiān)測(cè)各組大鼠肛溫、呼吸、心率，與假手術(shù)組比較，模型組及低、中、高劑量谷氨酰胺組大鼠肛溫降低大于1℃，呼吸頻率增快2倍以上，心率增加超過50%，符合S

4、IRS動(dòng)物模型診斷標(biāo)準(zhǔn)，通過解剖腹腔可見：腹腔大量血性帶惡臭滲出物，結(jié)扎盲腸端發(fā)黑、表面見黃色膿液等腹腔感染原發(fā)病灶表現(xiàn)，同時(shí)，模型組及低、中、高劑量谷氨酰胺組隨機(jī)抽取的血培養(yǎng)均培養(yǎng)出混合菌的感染證據(jù)，據(jù)此可認(rèn)為盲腸結(jié)扎穿孔膿毒癥大鼠造模成功。
　　2、各組大鼠脾臟、胸腺細(xì)胞凋亡指數(shù)結(jié)果：假手術(shù)組大鼠脾臟、胸腺存在較低的細(xì)胞凋亡；模型組大鼠脾臟、胸腺存在明顯的細(xì)胞凋亡，與假手術(shù)組比較具有顯著差異（p<0.01）；低、中、高劑量谷氨

5、酰胺組大鼠脾臟、胸腺細(xì)胞凋亡較模型組逐漸減少（p<0.05或p<0.01）；高劑量谷氨酰胺組抗細(xì)胞凋亡作用優(yōu)于低劑量谷氨酰胺組（p<0.05）。
　　3、各組大鼠脾臟、胸腺caspase3蛋白的陽性表達(dá)結(jié)果：假手術(shù)組大鼠脾臟、胸腺caspase3蛋白存在較低的陽性表達(dá)；模型組與假手術(shù)組比較大鼠脾臟、胸腺caspase3蛋白陽性表達(dá)積分顯著增高（p<0.01）；低、中、高劑量谷氨酰胺組較模型組大鼠脾臟、胸腺caspase3蛋白陽性表

6、達(dá)積分逐漸下降（p<0.05或p<0.01）；高劑量谷氨酰胺組大鼠脾臟、胸腺caspase3的陽性表達(dá)積分較低劑量谷氨酰胺低（p<0.01）。
　　4、各組大鼠脾臟、胸腺Hsp90蛋白的陽性表達(dá)結(jié)果：假手術(shù)組大鼠脾臟、胸腺Hsp90存在較低的陽性表達(dá)；模型組較假手術(shù)組大鼠脾臟、胸腺Hsp90蛋白陽性表達(dá)積分顯著增高（p<0.01）；低、中、高劑量谷氨酰胺組較模型組大鼠脾臟、胸腺Hsp90陽性表達(dá)積分逐漸增加（p<0.05或p<0.

7、01）；高劑量谷氨酰胺組大鼠脾臟、胸腺Hsp90的陽性表達(dá)積分較低劑量谷氨酰胺組高（p<0.01）。
　　5、各組大鼠血清IgM、IgG、IgA水平：模型組大鼠血清IgA、IgM、IgG水平均較假手術(shù)組顯著降低（p<0.01），低、中、高劑量谷氨酰胺組大鼠血清IgA、IgM、IgG水平均高于模型組（p<0.01或p<0.05），高劑量谷氨酰胺組大鼠血清IgA、IgM水平高于低劑量谷氨酰胺組（p<0.01或p<0.05）。
　

8、　6、各組大鼠血清TNF-a、IL-10水平：模型組大鼠血清TNF-a、IL-10水平均顯著高于假手術(shù)組（p<0.01），低、中、高劑量谷氨酰胺組與模型組比較大鼠血清TNF-ɑ水平均顯著降低（p<0.01），高劑量谷氨酰胺組較低劑量谷氨酰胺組大鼠血清TNF-ɑ水平更低（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　腸外谷氨酰胺補(bǔ)充可抑制膿毒癥大鼠淋巴器官細(xì)胞凋亡，且抗細(xì)胞凋亡作用與谷氨酰胺給藥劑量呈正相關(guān)性，谷氨酰胺可能是通過誘導(dǎo)Hsp