谷氨酰胺對鯉魚腸上皮細胞抗氧化能力的影響.pdf

1、本試驗以原代培養(yǎng)鯉魚腸上皮細胞為研究模型，研究了谷氨酰胺（Gln）對鯉魚腸上皮細胞抗氧化能力的影響。研究共包括2個試驗：試驗一、體外培養(yǎng)鯉魚IEC氧化應(yīng)激模型的建立；試驗二在試驗一的基礎(chǔ)上，應(yīng)用已建立的腸上皮細胞氧化應(yīng)激模型研究了Gln對氧化應(yīng)激狀態(tài)下IEC抗氧化能力的影響。 試驗一在原代培養(yǎng)的IEC培養(yǎng)基中分別添加0、15、30、45、60和100μM/L的過氧化氫（H2O2）溶液。結(jié)果表明：當H2O2濃度高于15μM/L時，

2、對原代培養(yǎng)鯉魚腸上皮細胞培養(yǎng)液乳酸脫氫酶（LDH）活力有極顯著（P<0．01）影響；當H2O2濃度高于45μ/L時，對原代培養(yǎng)鯉魚腸上皮細胞培養(yǎng)液丙二醛（MDA）含量有極顯著（P<0．01）影響；且過氧化氫濃度與LDH活性和MDA含量呈極顯著的正相關(guān)（r1=+0．840，P<0．01；r2=+0．763，P<0．01）。 試驗二共設(shè)6個處理：處理一，空白對照組，采用無血清培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)，不加處理因素；處理二，過氧化氫組，無血清培

3、養(yǎng)基加入濃度為100μM/L過氧化氫；處理三至六，Gln處理組，含濃度分別為4、8、12和20 mmol/LGln無血清培養(yǎng)基并加入終濃度為100μM/L，過氧化氫。結(jié)果表明：鯉魚腸上皮細胞用100μM/LH2O2處理后，細胞培養(yǎng)液中的LDH活性、MDA含量和細胞內(nèi)蛋白羰基含量均極顯著（P<0．01）高于空白對照組；添加不同濃度的Gln能極顯著（P<0．01）降低培養(yǎng)液中的LDH活性、MDA含量和細胞內(nèi)蛋白羰基含量，表明Gln能保護IE

4、C細胞膜完整性，減少脂質(zhì)和蛋白質(zhì)氧化。鯉魚腸上皮細胞用100μM/LH2O2處理后，堿性磷酸酶活性、鈉鉀ATP酶活性、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶活性均極顯著（P<0．01）低于空白對照組；添加不同濃度的Gln能極顯著（P<0．01）提高堿性磷酸酶、鈉鉀ATP酶和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶活性，表明Gln能抑制腸細胞功能受損。鯉魚腸上皮細胞用100μM/LH2O2處理后，鯉魚腸上皮細胞的抗超氧陰離子活力、抗羥自由基活力極顯著降低（P<0．01）；一氧化氮含量

5、極顯著升高（P<0．01）；添加不同濃度的Gln能極顯著（P<0．01）提高細胞抗超氧陰離子活力、抗羥自由基活力，降低一氧化氮的含量。表明Gln能夠提高細胞清除自由基的能力。鯉魚腸上皮細胞用100μM/LH2O2處理后，超氧化物歧化酶活性、過氧化氫酶活性、谷胱甘肽過氧化酶活性、谷胱甘肽還原酶活性、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性、還原型谷胱甘肽含量和還原型谷胱甘肽與氧化型谷胱甘肽的比值極顯著降低（P<0．01）；添加不同濃度的Gln能極顯著（P<