用飛行質(zhì)譜技術(shù)篩選肝癌患者血清中特異生物標(biāo)志物.pdf

1、目的：應(yīng)用飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(SELDI-TOF-MS surfac eenhanced laser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry 即表面增強(qiáng)激光解析及電離飛行時(shí)間質(zhì)譜)檢測(cè)肝癌患者血清中不同質(zhì)荷比蛋白質(zhì)的相對(duì)含量，同時(shí)建立血清蛋白質(zhì)組質(zhì)譜圖，并與肝硬化患者，肝炎患者，及正常人血清蛋白質(zhì)質(zhì)譜圖比較，篩選有價(jià)值的特異性腫瘤標(biāo)志物，探討其臨床應(yīng)用價(jià)值。 方法

2、：采用美國Ciphergen公司IMAC3(Immobilized MetalAffinity Capture，金屬親和表面)芯片和飛行時(shí)間質(zhì)譜儀，檢測(cè)40例肝癌患者，45例肝硬化患者，75例肝炎患者，和120例正常人血清中的蛋白質(zhì)相對(duì)含量。采用PBS Ⅱ型蛋白質(zhì)芯片閱讀儀對(duì)所有樣本飛行結(jié)果進(jìn)行閱讀并建立數(shù)據(jù)庫，同時(shí)轉(zhuǎn)化為波譜的形式表示。將四組血清檢測(cè)得到的蛋白質(zhì)波譜按：1、肝癌和正常人；2、肝癌和肝硬化；3、肝癌和肝炎；4、肝癌、肝炎

3、和正常人等分為四種不同的對(duì)比組合。然后采用BiomarkerWizard統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)其進(jìn)行方差分析，將分析所得到的含量有顯著性差異(P<0.0 5)的蛋白質(zhì)建立數(shù)據(jù)庫，導(dǎo)入BiomarkerPattern智能統(tǒng)計(jì)分析軟件，選擇相應(yīng)條件，對(duì)其進(jìn)行分組統(tǒng)計(jì)挖掘，從而得到能夠正確分組的特異性蛋白標(biāo)志物并構(gòu)建肝癌診斷模型。另外采用放射免疫定量法隨機(jī)檢測(cè)部分血清標(biāo)本中的CA19-9、FE蛋白及AFP的含量，按其臨床通用標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩檢判定，并和芯片檢測(cè)

4、結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。 結(jié)果：①在肝癌和正常人對(duì)比中，我們共發(fā)現(xiàn)47個(gè)含量有差異的蛋白，其中6個(gè)蛋白的相對(duì)含量在肝癌中明顯上調(diào)，44個(gè)明顯下調(diào)。用Biomarker Pattern軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，建立的診斷模型診斷準(zhǔn)確度為100﹪(150/150)，敏感性為100﹪(36/36)，特異性為100﹪(114/114)。②在肝癌和肝炎組對(duì)比中，我們共發(fā)現(xiàn)23個(gè)含量有差異的蛋白，其中2個(gè)蛋白的相對(duì)含量在肝癌中明顯上調(diào)，21個(gè)明顯下調(diào)。用Bi

5、omarker Pattern軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，建立的診斷模型診斷準(zhǔn)確度為94.44﹪(102/108)，敏感性為100﹪(36/36)，特異性為91.67﹪(66/72)。③在肝癌和肝硬化組對(duì)比中，我們共發(fā)現(xiàn)15個(gè)含量有差異的蛋白，其中7個(gè)蛋白的相對(duì)含量在肝癌中明顯上調(diào)，8個(gè)明顯下調(diào)。用Biomarker Pattern軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，建立的診斷模型診斷準(zhǔn)確度為94.94﹪(75/79)，敏感性為100﹪(36/36)，特異性為90

6、.70﹪(39/43)④在肝癌和肝炎以及正常人組對(duì)比中，我們共發(fā)現(xiàn)19個(gè)含量有差異的蛋白。用BiomarkerPattern軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，建立的診斷模型診斷準(zhǔn)確度為98.65﹪(219/222)，敏感性為100﹪(36/36)，特異性為98.39﹪(183/186)。⑤對(duì)照應(yīng)用CA19-9、FE蛋白及AFP等單一腫瘤標(biāo)志物對(duì)部分樣本隨機(jī)進(jìn)行試驗(yàn)診斷，發(fā)現(xiàn)SELDI-TOF-MS有更好的診斷效力。 結(jié)論：蛋白芯片飛行時(shí)間質(zhì)譜儀聯(lián)