尾加壓素Ⅱ?qū)θ毖跞四氺o脈內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)HIF-1α和VEGF表達(dá)的影響.pdf

1、目前,高居危害人類健康首位的疾病,心血管疾病和惡性腫瘤均涉及組織缺血缺氧及其誘導(dǎo)的血管新生機(jī)制。血管活性物質(zhì),特別是由血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的血管活性物質(zhì)在其中起著重要作用。尾加壓素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)是一種生長抑素樣環(huán)型結(jié)構(gòu)的新型血管活性神經(jīng)肽,是迄今為止所發(fā)現(xiàn)最強(qiáng)的縮血管活性肽。UⅡ也具有絲裂原作用,主要分布于心血管系統(tǒng)。缺氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia induciblefactor-1,HIP-1)是目前發(fā)現(xiàn)的唯一的特異性

2、缺氧狀態(tài)下發(fā)揮活性的轉(zhuǎn)錄因子,可與靶基因的缺氧反應(yīng)元件(HREs)結(jié)合,從而介導(dǎo)缺氧誘導(dǎo)性基因表達(dá),以增強(qiáng)機(jī)體對缺氧的適應(yīng)性。HIF-1α是唯一的氧調(diào)節(jié)亞單位,決定HIF-1的活性,能激活多種缺氧反應(yīng)基因的表達(dá),并受多種因子的調(diào)控和影響。組織缺氧可誘導(dǎo)HIP—1的活性上調(diào)并激活其下游因子內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的高表達(dá),以提高細(xì)胞在缺氧和局部缺血狀況下的生存能力。VE

3、GF是最重要的與血管新生有關(guān)的靶基因之一,也是目前已知最強(qiáng)的有絲分裂原之一,可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和分化,直接參與新生血管形成。因此我們推測,UⅡ可能與HIF-1和VEGF有一定聯(lián)系,共同參與某些影響細(xì)胞生長、增殖、分化、存活及凋亡的生理和病理過程。
　　 本研究在常氧/低氧條件下,不同時(shí)間、不同濃度UⅡ?qū)θ四氺o脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)和Eahy926細(xì)胞系表達(dá)HIF-1α和VEGF mRNA、蛋白的影響。
　　 W

4、estern Blotting結(jié)果顯示,在常氧條件下,以10-9～10-4mol/L濃度的UⅡ作用于HUVECs和以10-9～10-7mol/L濃度的UⅡ作用于Eahy926細(xì)胞系9h,其中10-7～、10-8和10-9mol/L UⅡ均使兩種細(xì)胞HIF-1α蛋白表達(dá)量明顯高于對照組(p<0.05)。以10-7mol/L濃度的UⅡ分別作用于HUVECs3h、6h、9h、12h和24h,HIF-1α蛋白表達(dá)量隨作用時(shí)間增加而增加,9h時(shí)表

5、達(dá)量達(dá)到最大值,之后隨處理時(shí)間增加而降低。在缺氧條件下(95％N2,5％CO2),分別以10-8和10-9mol/L濃度的UⅡ作用于HUVECs和Eahy926細(xì)胞系5h,hypoxia和hypoxia+UⅡ處理組HIF-1α表達(dá)量均明顯高于對照組(p<0.01)。hypoxia+UⅡ10-8處理組HIF-1α表達(dá)量最高,明顯高于hypoxia對照組(p<0.01)。
　　 RT-PCR檢測結(jié)果,在常氧條件下分別以10-9～10

6、-7mol/L濃度的UⅡ作用于HUVECs9h,各處理組HIF-1α和VEGFmRNA表達(dá)量均明顯高于對照組(p<0.05),且隨UⅡ作用濃度增加而升高。10-7mol/L UⅡ處理組HIF-1α和VEGF mRNA表達(dá)量最高。
　　 ELISA檢測結(jié)果,在常氧條件下上述濃度的UⅡ分別作用于HUVECs9h,各處理組的VEGF表達(dá)量均高于對照組(p<0.05)。以10-7mol/L濃度的UⅡ分別作用于HUVECs3h、6h、9h

7、、12h和24h。6h VEGF表達(dá)量最高,9h和12h逐漸降低。缺氧條件下,分別以10-9～10-7mol/L濃度的UⅡ作用于HUVECs5h,hypoxia對照組、hypoxia+UⅡ10-7和hypoxia+UⅡ10-8處理組VEGF的表達(dá)量均明顯高于對照組(p<0.05)。hypoxia+UⅡ10-8處理組VEGF蛋白的表達(dá)量最高,而hypoxia+UⅡ10-9和hypoxia+UⅡ10-8卻低于hypoxia對照組。