姜黃素對缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：觀察姜黃素(curcumin，cur)對缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVEC)內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)及一氧化氮(Nitric Oxide，NO)表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，探討姜黃素對內(nèi)皮細(xì)胞缺血再灌注損傷的保護(hù)作用機(jī)制。
　　 方法：建立缺氧／復(fù)氧(hypo

2、xia/reoxygenation，H/R)損傷模型，分為正常對照組；H/R損傷模型組；H/R損傷+Cur預(yù)處理組。使用MTT法檢測不同的缺氧和復(fù)氧時間對HUVEC的損傷作用及Cur的干預(yù)對HUVEC的生存率影響。使用化學(xué)法測定eNOS、iNOS的活性，亞硝酸還原法檢測NO的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：(1)缺氧損傷對HUVEC活性的影響與正常對照組相比，HUVEC缺氧2h復(fù)氧2h(H2R2)的生存率下降到80％左右，缺氧4h復(fù)氧4

3、h(H4R4)的生存率下降為70％左右，而缺氧6h復(fù)氧6h(H6R6)模型的生存率就下降至60％左右，缺氧12h以后，細(xì)胞由原本的貼壁生長狀態(tài)變?yōu)椴淮筚N壁、圓縮并呈雜亂分布，幾無結(jié)晶生成。
　　 (2) Cur對HUVEC HR損傷的保護(hù)作用①Cur對HUVEC H6R6損傷模型有保護(hù)作用，此作用在較小劑量范圍內(nèi)時呈劑量依賴型，Cur濃度低于5μ M時細(xì)胞生存率呈上升趨勢，且在劑量為5μ M時細(xì)胞存活率達(dá)到115％左右，劑量大于

4、10μ M濃度時，保護(hù)作用呈逐漸降低趨勢。②不同缺氧復(fù)氧模型(H2R2，H4R4，H6R6)加用濃度為5μ M的Cur作用于HUVEC時，細(xì)胞生存率較單純?nèi)毖鯊?fù)氧時明顯增高。
　　 (3) Cur對HUVEC NO含量、NOS活性的影響 Cur處理細(xì)胞4h，8h，12h，NO含量與對照組相比均無明顯差異；細(xì)胞eNOS和iNOS活性與對照組相比均無明顯變化。
　　 (4)不同缺氧復(fù)氧時間對HUVEC NO含量、NOS活性的

5、影響：①用缺氧復(fù)氧模型處理HUVEC H2R2，H4R4，H6R6，培養(yǎng)液上清中的NO含量隨時間的延長而逐漸升高，與對照組相比均有明顯差異；細(xì)胞iNOS活性隨時間延長而逐漸升高，與對照組相比均有明顯增加，eNOS活性與之相反，隨著時間的延長呈下降趨勢②模擬缺氧處理HUVEC H6R2，H6R4，H6R6，H6R8，H6R12，H6R24培養(yǎng)液上清中的NO含量隨復(fù)氧時間的延長而逐漸升高，H6R6時達(dá)到最高值，然后出現(xiàn)下降的趨勢，與對照組相

6、比均有明顯差異；細(xì)胞iNOS活性與NO的含量有類似的趨勢；eNOS活性隨復(fù)氧時間的延長逐漸下降，與對照組相比均有明顯降低
　　 (5)Cur+H/R對HUVEC NO含量、eNOS和iNOS表達(dá)的影響 Cur(5μM)+H2R2，H4R4，H6R6處理HUVEC，NO含量隨缺氧復(fù)氧的時間增加而增高，比H/R處理時相比明顯降低，與對照組相比略增高；iNOS與H/R處理相比明顯下降，與對照組相比均有明顯增加；eNOS活性與H/R處理