低氧誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系（ECV304）分泌VEGF表達(dá)及其機(jī)制.pdf

1、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)是內(nèi)皮細(xì)胞特異性的促有絲分裂原，它在血管新生的過(guò)程中起著非常重要的作用。本實(shí)驗(yàn)采用低氧培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系ECV304細(xì)胞的模型，觀察到低氧對(duì)于ECV304細(xì)胞有一定的損傷作用。乳酸脫氫酶是檢測(cè)細(xì)胞損傷的一個(gè)指標(biāo)，首先檢測(cè)了低氧不同時(shí)間ECV304細(xì)胞釋放的乳酸脫氫酶活性，觀察到乳酸脫氫酶的活性在低氧6小時(shí)和12小時(shí)的時(shí)候相比對(duì)照組(常氧狀態(tài))有明顯增加，隨后逐漸降低。直至24小時(shí)恢復(fù)至對(duì)照組水平。本文

2、收集常氧狀態(tài)，低氧12小時(shí)的細(xì)胞總RNA來(lái)檢測(cè)VEGFmRNA水平的變化，同樣收集常氧狀態(tài)，低氧24小時(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)液上清來(lái)檢測(cè)VEGF蛋白水平的變化，觀察到低氧不僅能夠誘導(dǎo)VEGFmRNA的表達(dá)而且還能誘導(dǎo)VEGF蛋白的分泌。接下來(lái)本文又檢測(cè)了ERK和P38絲裂素活化蛋白激酶(MAPK)在低氧誘導(dǎo)VEGF表達(dá)中的作用。觀察到，在低氧過(guò)程中ERK及P38均能夠被激活，且在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)能維持一定的活性。加入ERK、P38的抑制劑后，ERK和P

3、38在低氧過(guò)程中的激活均受到抑制。與此同時(shí)，低氧引起的VEGF分泌無(wú)論是mRNA還是蛋白水平與不加抑制劑組相比均減少，也就是說(shuō)在加入ERK和P38的抑制劑后，低氧不能刺激VEGF的表達(dá)明顯升高。由此本文推測(cè)，低氧引起ECV304細(xì)胞分泌VEGF增加有可能是通過(guò)ERK和P38通路來(lái)介導(dǎo)。有研究報(bào)道，低氧可以在許多細(xì)胞中引起ERK通路的激活并且ERK的激活參與了低氧引起VEGF表達(dá)增加的反應(yīng)。然而，P38在低氧引起內(nèi)皮細(xì)胞分泌VEGF的反應(yīng)