低氧誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞系（ECV304）分泌VEGF表達及其機制.pdf

1、血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)是內(nèi)皮細胞特異性的促有絲分裂原，它在血管新生的過程中起著非常重要的作用。本實驗采用低氧培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞系ECV304細胞的模型，觀察到低氧對于ECV304細胞有一定的損傷作用。乳酸脫氫酶是檢測細胞損傷的一個指標，首先檢測了低氧不同時間ECV304細胞釋放的乳酸脫氫酶活性，觀察到乳酸脫氫酶的活性在低氧6小時和12小時的時候相比對照組(常氧狀態(tài))有明顯增加，隨后逐漸降低。直至24小時恢復至對照組水平。本文

2、收集常氧狀態(tài)，低氧12小時的細胞總RNA來檢測VEGFmRNA水平的變化，同樣收集常氧狀態(tài)，低氧24小時的細胞培養(yǎng)液上清來檢測VEGF蛋白水平的變化，觀察到低氧不僅能夠誘導VEGFmRNA的表達而且還能誘導VEGF蛋白的分泌。接下來本文又檢測了ERK和P38絲裂素活化蛋白激酶(MAPK)在低氧誘導VEGF表達中的作用。觀察到，在低氧過程中ERK及P38均能夠被激活，且在較長時間內(nèi)能維持一定的活性。加入ERK、P38的抑制劑后，ERK和P

3、38在低氧過程中的激活均受到抑制。與此同時，低氧引起的VEGF分泌無論是mRNA還是蛋白水平與不加抑制劑組相比均減少，也就是說在加入ERK和P38的抑制劑后，低氧不能刺激VEGF的表達明顯升高。由此本文推測，低氧引起ECV304細胞分泌VEGF增加有可能是通過ERK和P38通路來介導。有研究報道，低氧可以在許多細胞中引起ERK通路的激活并且ERK的激活參與了低氧引起VEGF表達增加的反應。然而，P38在低氧引起內(nèi)皮細胞分泌VEGF的反應