DDR2對缺氧誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞HIF-1α和VEGF表達(dá)的影響.pdf

1、【研究背景】盤狀結(jié)構(gòu)域受體2（DDR2）是一類受體型蛋白酪氨酸激酶（RTKS），DDR2通過與細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）相互作用參與了多種細(xì)胞的遷移，粘附，分化，轉(zhuǎn)移，并在腫瘤、自身免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。DDR2被膠原激活后，可誘導(dǎo)受體發(fā)生自磷酸化，隨后介導(dǎo)眾多信號傳導(dǎo)途徑，調(diào)控細(xì)胞的生物學(xué)行為。脈絡(luò)膜新生血管是眼內(nèi)新生血管的重要表現(xiàn)形式之一，與眼部多種疾病有關(guān)，是造成致盲的主要原因之一，目前尚無有效的治療方法，有關(guān)其發(fā)生機(jī)制

2、的研究，尋找針對CNV病因，抑制新生血管生成的有效療法，將為未來治療CNV提供可能。目前關(guān)于DDR2是否參與了脈絡(luò)膜新生血管發(fā)生發(fā)展尚不明確。本實(shí)驗(yàn)探討DDR2在CNV發(fā)生中的作用。
　　【目的】觀察缺氧狀態(tài)下人RPE細(xì)胞中DDR2表達(dá)以及激活或是抑制狀態(tài)的DDR2對人RPE細(xì)胞中缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）活化和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）表達(dá)的影響，探討DDR2在CNV發(fā)生中的作用。
　　【方法】運(yùn)用200μmol

3、/L CoCl2處理RPE細(xì)胞建立化學(xué)缺氧模型，于缺氧后0，2，6，12，24h用免疫熒光，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR），實(shí)時熒光定量分析法（Q-PCR）和免疫蛋白印跡法(Western blot)檢測RPE細(xì)胞中 DDR2的表達(dá)。缺氧條件下以Ⅰ型膠原（10μg／ml，35℃孵箱內(nèi)孵育）刺激，分別于作用后0，2，6，12，24hRT-PCR，Q-PCR和Western blot檢測RPE細(xì)胞中HIF-1α，RT-PCR和酶聯(lián)免疫吸

4、附試驗(yàn)（ELISA）法觀察 RPE細(xì)胞培養(yǎng)上清中 VEGF表達(dá)，缺氧條件下給 RPE細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNADDR2后分別于作用后0，2，6，12，24hRT-PCR，Q-PCR和Western blot檢測 RPE細(xì)胞中 HIF-1α的表達(dá)，RT-PCR和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法觀察RPE細(xì)胞培養(yǎng)上清中VEGF表達(dá)。
　　【結(jié)果】正常RPE細(xì)胞細(xì)胞核，胞質(zhì)，胞膜上有微弱的DDR2熒光表達(dá)，隨著缺氧時間延長DDR2表達(dá)減弱；缺氧