肉蓯蓉及其有效成分抗骨質(zhì)疏松藥效學(xué)及代謝組學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　以寧夏栽培肉蓯蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma為研究對(duì)象，建立肉蓯蓉HPLC特征圖譜和含量測(cè)定方法，用于肉蓯蓉粗提物和總苯乙醇苷的定性定量分析；以去卵巢致大鼠（小鼠）骨質(zhì)疏松為模型，評(píng)價(jià)肉蓯蓉提取物、總苯乙醇苷有效部位及苯乙醇苷有效成分抗骨質(zhì)疏松的藥效作用；以代謝組學(xué)為手段，采用UPLC-QTOF分析技術(shù)，探討抗骨質(zhì)疏松的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.以松果菊苷為參照峰，毛蕊花糖

2、苷等5種成分為指標(biāo)性成分，建立肉蓯蓉 HPLC-DAD特征圖譜。
　　2.以去卵巢致骨質(zhì)疏松大鼠（小鼠）為模型模擬絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松的病理狀態(tài)，口服給予骨質(zhì)疏松動(dòng)物肉蓯蓉提取物高、中、低劑量組分別是（800、400、200 mg/kg），肉蓯蓉總苯乙醇苷有效部位（240、120、60 mg/kg），肉蓯蓉苷A高、中、低劑量組（80、40、20 mg/kg），毛蕊花糖苷高、中、低劑量組（80、40、20 mg/kg），2'-乙酰麥角

3、甾苷高、中、低（40、20、10 mg/kg），6'-乙酰麥角甾苷高劑量組（40、20、10 mg/kg）。連續(xù)給藥12周，通過(guò)檢測(cè)骨密度、骨組織形態(tài)、骨形成和骨吸收等指標(biāo)，探討肉蓯蓉各給藥組對(duì)去卵巢致骨質(zhì)疏松大鼠（小鼠）的藥效作用。
　　3.以上述各組大鼠（小鼠）血清為分析對(duì)象，建立UPLC-QTOF方法，對(duì)樣本進(jìn)行正、負(fù)離子模式的數(shù)據(jù)采集；以代謝組學(xué)為技術(shù)手段，采用PCA和PLS-DA等統(tǒng)計(jì)方法，建立各組判別模型，以p<0.0

4、5值和VIP值>1篩選差異性代謝物，經(jīng)數(shù)據(jù)庫(kù)、文獻(xiàn)和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照等確定代謝物結(jié)構(gòu)，同時(shí)分析各給藥組對(duì)差異性代謝物的調(diào)節(jié)作用。
　　結(jié)果:
　　1.建立了可以用于肉蓯蓉定性分析的 HPLC特征圖譜。
　　2.肉蓯蓉提取物、總苯乙醇苷有效部位和有效成分均顯示不同程度的提高去卵巢大鼠（小鼠）骨密度、改善骨微觀結(jié)構(gòu)、提高骨形成指標(biāo)含量和降低骨吸收指標(biāo)含量的藥效作用。
　　3.從正、負(fù)離子模式下篩選到并經(jīng)數(shù)據(jù)庫(kù)和文獻(xiàn)鑒定了纈

5、氨酸等33個(gè)有差異的內(nèi)源性代謝物，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照鑒定了3個(gè)代謝物，其余代謝物的結(jié)構(gòu)還需要標(biāo)準(zhǔn)品的進(jìn)一步確證。與假手術(shù)組相比，白三烯F4、PC（22：6/18：1）、PC（40：6）、PI（32：0）、PC（32：1）、溶血磷脂酰膽堿（20：3）、LPE、LPC18:0a、LysPc20:4、磷酸鞘氨醇、?；悄懰?、SM、L-苯丙氨酸、二油酰磷脂酰膽堿、纈氨酸、N-甲基-氨基異丁酸、吲哚-3-乙酰胺、25-羥基維生素 D3、亞麻酸、植物鞘氨

6、醇在模型組大鼠血清中顯著性下調(diào)，肉堿、2-甲基丙二酸、5-羥基-N-甲?；B(niǎo)嘌呤，甲基絲氨酸、奎寧酸、糖昔脫氧膽3-葡糖苷酸、脫氧腺苷、3-羥基苯乙酸、5-HIAA在大鼠血清中顯著性上調(diào)，其中肉蓯蓉總苯乙醇苷可使白三烯 F4、PC（22：6/18：1）、PC（40：6）、PI（32：0）、PC（32：1）、溶血磷脂酰膽堿（20：3）、LPE、磷酸鞘氨醇、?；悄懰?、SM、L-苯丙氨酸、二油酰磷脂酰膽堿、苯基丙酮酸、纈氨酸、肉堿、2-甲基丙

7、二酸、5-羥基-N-甲?；B(niǎo)嘌呤、甲基絲氨酸、奎寧酸、糖昔脫氧膽3-葡糖苷酸、脫氧腺苷、3-羥基苯乙酸、5-HIAA明顯的回調(diào)，它的作用機(jī)制主要通過(guò)干預(yù)脂肪酸代謝、氨基酸代謝、磷脂代謝等。
　　結(jié)論：
　　1.建立的肉蓯蓉HPLC特征圖譜可以用于肉蓯蓉的定性分析。
　　2.肉蓯蓉提取物、總苯乙醇苷有效部位和有效成分具有治療去卵巢致骨質(zhì)疏松大鼠（小鼠）的藥效作用。
　　3.肉蓯蓉總苯乙醇苷可能通過(guò)調(diào)節(jié)纈氨酸等33種