中間層在成釉細(xì)胞分化及分泌期的形態(tài)學(xué)觀察及礦化相關(guān)蛋白的表達(dá)研究.pdf

1、牙齒的發(fā)育作為一個上皮．間充質(zhì)、上皮．上皮交互誘導(dǎo)發(fā)揮重要作用的復(fù)雜的多階段過程，在其發(fā)育過程中每個組織結(jié)構(gòu)都會參與其中，各種組織細(xì)胞以及各組織細(xì)胞之間大量信號分子的產(chǎn)生和信號的傳導(dǎo)都是牙齒正常發(fā)育所必需的。中間層細(xì)胞雖數(shù)量不多，但其位置特殊，它緊靠不同分化狀態(tài)的內(nèi)釉上皮并伴隨整個內(nèi)釉上皮的分化過程和成釉細(xì)胞的分泌過程，由開始時的2-3層細(xì)胞結(jié)構(gòu)演變?yōu)閱渭?xì)胞結(jié)構(gòu)，并隨成釉細(xì)胞分泌的結(jié)束逐漸消失。中間層的建立及其在牙胚發(fā)育中與內(nèi)釉上皮/成

2、釉細(xì)胞間多種信號分子的交互作用，對釉質(zhì)的正常發(fā)育是必不可少的，中間層在牙胚發(fā)育特別是牙胚形態(tài)發(fā)生中發(fā)揮關(guān)鍵作用。 研究目的： 本實(shí)驗(yàn)擬建立鼠牙胚中間層發(fā)育的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停捎肏E染色、免疫組化等技術(shù)，明確中間層細(xì)胞在釉質(zhì)形成過程中的形態(tài)學(xué)變化，并探討中間層細(xì)胞在釉質(zhì)分泌與礦化過程中的生物學(xué)功能，為進(jìn)一步研究其在成釉細(xì)胞分化和釉質(zhì)形成中的具體作用機(jī)制提供理論依據(jù)。 研究方法： 1、建立出生后BALB/C小鼠牙胚

3、中間層發(fā)育HE染色的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?；電鏡觀察其超微結(jié)構(gòu)的變化。 2、采用原位末端標(biāo)記法(TUNEL法)及SP免疫組織化學(xué)技術(shù)，觀察中間層及成釉細(xì)胞在分化各階段細(xì)胞凋亡與增殖的表達(dá)情況； 3、SP免疫組化技術(shù)檢測ALP、OC、BSP、OPN、DMP1、E-cad、FMN、BGN、DCN等礦化相關(guān)蛋白在成釉階段于中間層和成釉細(xì)胞中的時空表達(dá)。 研究結(jié)果： 1、鐘狀晚期細(xì)胞處于分化期，中間層為2-3層的多細(xì)胞層結(jié)構(gòu)，

4、電鏡下可見少量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等細(xì)胞器成分，內(nèi)釉上皮呈柱狀或高柱狀，可見中間層與成釉細(xì)胞間的橋粒連接；釉質(zhì)分泌期，中間層呈明顯的單細(xì)胞結(jié)構(gòu)，細(xì)胞排列緊密，與周圍組織的界限清楚，成釉細(xì)胞呈高柱狀，可見大量釉質(zhì)的分泌，線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體等細(xì)胞器成分明顯增多，細(xì)胞間的橋粒連接明顯；隨著釉質(zhì)的不斷建立，釉質(zhì)分泌基本完成，中間層結(jié)構(gòu)已不易辨認(rèn)，此時牙齒亦部分萌出，電鏡下細(xì)胞間聯(lián)系疏松，細(xì)胞器成分萎縮變減少。 2、早期中間

5、層細(xì)胞PCNA強(qiáng)陽性表達(dá)，成釉細(xì)胞亦成陽性，牙冠發(fā)育的后期PCNA在兩者中的表達(dá)逐漸減弱并消失；凋亡在分化各期的成釉細(xì)胞及晚期的中間層細(xì)胞中皆有表達(dá)，尤其在成熟期成釉細(xì)胞中的表達(dá)明顯強(qiáng)于釉質(zhì)形成早期。 3、在釉質(zhì)形成的階段，ALP、OC、BSP、OPN、DMP1、E-cad和FM在中間層和成釉細(xì)胞中有陽性表達(dá)，ALP、E-cad在中間層的陽性表達(dá)先于成釉細(xì)胞，隨分泌過程陽性表達(dá)由中間層轉(zhuǎn)移到成釉細(xì)胞；BSP、OPN、DMP1和：

6、FM在中間層和成釉細(xì)胞陽性表達(dá)僅見于成釉細(xì)胞分泌的后期，分泌早期未見陽性表達(dá)。 研究結(jié)論： 1、在釉質(zhì)分泌及礦化過程中中間層細(xì)胞器成分及與成釉細(xì)胞間的連接逐漸增多，提示中間層在釉質(zhì)形成中起到了一定的物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)及營養(yǎng)支持功能。 2、細(xì)胞增殖與凋亡是牙齒正常發(fā)育所必需的重要調(diào)控機(jī)制，中間層細(xì)胞與成釉細(xì)胞間的增殖與凋亡在時空表達(dá)強(qiáng)弱程度變化上具有一致性，具有一定“量”的變化相關(guān)性，提示中間層對成釉細(xì)胞的分化及釉質(zhì)形態(tài)的正