緩激肽對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的NIT-1細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制.pdf

1、研究背景：激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)是體內(nèi)的一個(gè)重要調(diào)節(jié)系統(tǒng)。激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)包括激肽釋放酶、激肽原、激肽、激肽BK1、BK2受體和激肽酶等幾種組分。激肽釋放酶是一類絲氨酸蛋白酶，可催化低分子量的激肽原釋放出有血管活性的激肽。緩激肽是生理?xiàng)l件下主要的激肽類物質(zhì)。緩激肽與其BK2受體結(jié)合后能激活多種信號(hào)途徑，從而發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)，包括擴(kuò)張血管，平滑肌的收縮和舒張，細(xì)胞增殖，炎癥和疼痛。糖尿病有1型和2型兩種，它們都表現(xiàn)為進(jìn)行性的β細(xì)胞功能

2、衰竭。在1型糖尿病中，以β細(xì)胞的自身免疫為典型表現(xiàn)，從而誘導(dǎo)β細(xì)胞的進(jìn)行性死亡。2型糖尿病則伴有不同程度的β細(xì)胞缺乏以及不同程度的胰島素抵抗。Β細(xì)胞的凋亡因此是1型糖尿病和2型糖尿病的一個(gè)共同特征。一些研究表明，緩激肽可以通過激活BK2受體使鈣離子內(nèi)流從而促進(jìn)β細(xì)胞分泌胰島素，此外，人組織激肽釋放酶也可以改善果糖誘導(dǎo)的高血壓伴胰島素抵抗大鼠的高胰島素血癥。這些都提示了激肽釋放酶系統(tǒng)在糖尿病中發(fā)揮了重要的保護(hù)性作用。但是，激肽釋放酶系統(tǒng)在

3、細(xì)胞水平是否具有抗凋亡作用還不清楚。在本實(shí)驗(yàn)中，我們探尋了緩激肽對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的NIT-1細(xì)胞凋亡的作用及其可能的相關(guān)機(jī)制。
　　 方法：在培養(yǎng)的NIT-1細(xì)胞中，給予外源性緩激肽作用2小時(shí)，在需要的試驗(yàn)組中，在緩激肽干預(yù)之前加入緩激肽BK2特異性受體阻滯劑HOE140預(yù)處理30分鐘，然后再應(yīng)用TNF-α(100ng/ml)誘導(dǎo)NIT-1細(xì)胞凋亡24小時(shí)。分別用SRB法和Annexin V/PI雙染流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡情況。用w

4、estern blotting檢測(cè)各組細(xì)胞中Bcl-2、Bcl-xl、Bax和PI3K的表達(dá)水平以及Akt和MAPK的磷酸化水平。
　　 結(jié)果：試驗(yàn)均重復(fù)三次：TNF-α能夠誘導(dǎo)NIT-1細(xì)胞的凋亡，外源性的緩激肽可以抑制TNF-α誘導(dǎo)的NIT-1細(xì)胞的凋亡，HOE140可以阻斷緩激肽的效應(yīng)。Annexin V/PI雙染流式細(xì)胞儀檢測(cè)NIT-1細(xì)胞凋亡發(fā)現(xiàn)，TNF-α組細(xì)胞凋亡比例明顯高于對(duì)照組，BK組細(xì)胞凋亡比例明顯低于TNF

5、-α組，BK+HOE140組細(xì)胞凋亡比例與BK組相比則明顯增高。Western blotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，TNF-α組Bcl-2，Bcl-xl和PI3K的表達(dá)水平以及Akt和MAPK的磷酸化水平較之對(duì)照組明顯降低，相反，Bax的表達(dá)水平相對(duì)于對(duì)照組明顯增高；而BK組中Bcl-2，Bcl-xl和PI3K的表達(dá)水平以及Akt和MAPK的磷酸化水平較之TNF-α組明顯增高，Bax的表達(dá)水平則明顯降低；BK+HOE140組與BK組相比可阻斷緩激

6、肽這一效應(yīng)，而與TNF-α組無明顯差異。
　　 結(jié)論：我們的研究結(jié)果顯示，外源性緩激肽能夠抑制TNF-α誘導(dǎo)的小鼠胰島素瘤細(xì)胞NIT-1的凋亡，其可能的機(jī)制是緩激肽與BK2受體結(jié)合，通過激活細(xì)胞內(nèi)的PI3K-Akt通路和MAPK通路，并通過上調(diào)Bcl-2，Bcl-xl的表達(dá)水平和下調(diào)Bax的表達(dá)水平來發(fā)揮其抗凋亡作用。但是，緩激肽是通過多條信號(hào)通路發(fā)揮生物學(xué)作用的，與細(xì)胞內(nèi)的凋亡信號(hào)通路之間存在著復(fù)雜的交叉通話，其機(jī)制還有待進(jìn)一