血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與人非小細(xì)胞肺癌的相關(guān)性研究.pdf

1、[研究背景]
　　 肺癌是當(dāng)今世界上嚴(yán)重威脅人類生命與健康的最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,已成為各種癌癥死亡的首要因?yàn)?。其中約80％為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lungcancer,NSCLC)。80％的NSCLC患者在確診時(shí)已屬晚期,失去手術(shù)機(jī)會(huì)。
　　 NSCLC的治療主要包括手術(shù)、化療、放療和分子靶向治療,無(wú)論是何種治療都需要一個(gè)指導(dǎo)和評(píng)判NSCLC治療效果的有效指標(biāo)。
　　 目前臨床廣泛采用的評(píng)

2、價(jià)指標(biāo)是TNM分期,這個(gè)分期固然為臨床NSCLC的治療和預(yù)后判斷提供了一定的指導(dǎo)價(jià)值。但是在臨床工作中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)在各個(gè)分期中有部分患者的預(yù)后與預(yù)期的不同。臨床有相當(dāng)一部分NSCLC患者(如:Ⅰ期NSCLC患者,術(shù)后5年生存率僅為60％-70％),盡管都得到了早期的診斷和治療,但結(jié)果卻短期內(nèi)出現(xiàn)了復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,無(wú)疑這些患者的腫瘤在生物學(xué)行為特點(diǎn)方面表現(xiàn)為更具有侵襲性。因此,單純以TNM分期來(lái)判斷肺癌預(yù)后和指導(dǎo)治療顯然是不夠的。
　　

3、近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),從肺癌的早期發(fā)生如支氣管上皮增生到腫癌生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移和預(yù)后復(fù)發(fā)都與血管生成有關(guān)。和其他實(shí)體瘤一樣,新生血管為肺癌提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng),也是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的前提。腫瘤血管的生成涉及到多種基因的突變和不同細(xì)胞因子及受體的表達(dá),受正負(fù)兩方面因素的調(diào)控。在腫瘤組織,由于促血管生成因子和抗血管生成因子二者之間平衡失調(diào),血管生成促進(jìn)因子占優(yōu)勢(shì)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是目前所知的作用最強(qiáng)的促血管生成因子,參與血管生成的多

4、個(gè)環(huán)節(jié)。在促進(jìn)腫瘤微血管生成中起著關(guān)鍵作用。NSCLC組織中VEGF的表達(dá)及腫瘤微血管密度(MVD)可能與NSCLC的生物學(xué)行為及預(yù)后相關(guān),針對(duì)VEGF及其受體的靶向治療有可能成為NSCLC的一種新的治療途徑。
　　 1983年Folkman首先提出肝素具有血管生成抑制作用。國(guó)外學(xué)者晚近研究發(fā)現(xiàn),低分子肝素(LMWH)在改善腫瘤患者生活質(zhì)量,提高患者生存期等方面起著積極作用,推測(cè)LMWH可能干擾腫瘤細(xì)胞向血管內(nèi)膜的黏連與侵襲、腫

5、瘤的血管生成等環(huán)節(jié)。
　　 目前有關(guān)肺癌組織中VEGF的表達(dá)和MVD的相關(guān)性及二者與肺癌臨床分期、病理分型等的關(guān)系方面的研究及LMWH對(duì)人NSCLCA549細(xì)胞表達(dá)VEGF的影響的體外研究國(guó)內(nèi)外報(bào)道尚少。本研究擬對(duì)此分別進(jìn)行探討。(1)運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)VEGF在肺癌中的表達(dá)并測(cè)定微血管密度(MVD),并結(jié)合肺癌臨床病理學(xué)特征及預(yù)后進(jìn)行分析,探討VEGF表達(dá)與NSCLC腫瘤組織MVD的相關(guān)性；(2)通過(guò)分析VEGF表達(dá)及MVD

6、與肺癌臨床病理學(xué)特征及預(yù)后的關(guān)系,試圖尋找對(duì)非小細(xì)胞肺癌的診斷和預(yù)后判斷有價(jià)值的腫瘤標(biāo)記物,為臨床提供依據(jù)；(3)采用熒光定量-PCR(real-time PCR)等方法探討LMWH對(duì)人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子表達(dá)水平的影響,為臨床應(yīng)用LMWH治療NSCLC提供實(shí)驗(yàn)支持和理論依據(jù)。
　　 第一部分
　　 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及與血管生成的相關(guān)性研究
　　 目的:研究血管內(nèi)皮生

7、長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá),同時(shí)探討VEGF對(duì)NSCLC血管生成的影響及兩者之間可能具有的相關(guān)性,并探討它們與非小細(xì)胞肺癌(non small cell lungcancer,NSCLC)生物學(xué)行為的關(guān)系。
　　 方法:選用1996年1月至1999年1月蚌埠醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心胸外科手術(shù)切除并經(jīng)病理學(xué)確診的43例非小細(xì)胞肺癌癌組織,應(yīng)用免疫組織化

8、學(xué)S-P法檢測(cè)組織中的VEGF的表達(dá),并對(duì)組織中的血管進(jìn)行染色、計(jì)數(shù)。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。數(shù)值變量資料均以x±s表示,分別采用t檢驗(yàn),單因素方差分析對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。分類變量資料采用X2檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果:1、在43例NSCLC中VEGF表達(dá)陽(yáng)性者23例,陽(yáng)性表達(dá)率為53.50％(23/43)；43例NSCLC的MVD均值為31.98+14.93。2、NSCLC中10例腺癌組織VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率為

9、50％(5/10),33例鱗癌組織VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率為59.4％(18/33);經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析二者之間的差異無(wú)顯著性(P>0.05)。MVD的均值在磷癌中為30.91±15.25,腺癌中為35.50±15.28,二者之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3、VEGF在Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期NSCLC中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為12.50％,66.67％和91.67％,臨床中晚期(Ⅲ期)陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于臨床早期(Ⅰ期,Ⅱ期)(P<0.01)；MVD

10、的均值在Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期NSCLC中分別為21.25±7.86,32.87±15.27和45.17±11.49,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。4、根據(jù)有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,把43例NSCLC分為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移兩組。在無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF陽(yáng)性表達(dá)率為11.11％(2/18),在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF陽(yáng)性表達(dá)率為84.00％(21/25),有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MVD值分別為39.56±14.73和21.44±7.44,在兩組

11、間 VEGF陽(yáng)性表達(dá)率、MVD值差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。5、在NSCLC組織中,VEGF表達(dá)陽(yáng)性組的MVD為42.83±11.92,陰性組的MVD為19.50±5.73,二者相比差異有顯著性(P<0.01)。
　　 結(jié)論:1、VEGF在NSCLC組織中高表達(dá)。VEGF的表達(dá)與NSCLC的瘤體大小、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān),而與NSCLC的組織學(xué)分類無(wú)關(guān)。2、NSCLC組織中MVD值與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞分化程度

12、及TNM分期有關(guān),NSCLC組織中血管生成活躍,微血管密度明顯增高。血管生成與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程有著密切的聯(lián)系。3、VEGF的陽(yáng)性表達(dá)與NSCLC中的MVD值呈顯著正相關(guān),VEGF正向調(diào)節(jié)NSCLC的血管生成,以VEGF或其受體為靶點(diǎn)將有望成為非小細(xì)胞肺癌新的治療途徑。
　　 第二部分
　　 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、微血管密度與人非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的相關(guān)性研究
　　 目的:研究血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascula

13、r endothelial growth factor,VEGF)在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá),同時(shí)探討VEGF對(duì)NSCLC血管生成的影響及兩者之間可能具有的相關(guān)性,并探討它們與非小細(xì)胞肺癌(non small cell lungcancer,NSCLC)生物學(xué)行為及預(yù)后的關(guān)系,為肺癌的臨床診斷、預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)移和治療提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法:選用1996年1月至1999年1月蚌埠醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心胸外科手術(shù)切除并經(jīng)病理學(xué)確診的43例非小

14、細(xì)胞肺癌癌組織,應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)組織中的VEGF的表達(dá),并對(duì)組織中的血管進(jìn)行染色、計(jì)數(shù)。采用Kalpan-Meier方法,對(duì)病例隨訪資料進(jìn)行生存分析并經(jīng)Log-rank檢驗(yàn)；COX模型(似然比檢驗(yàn))用于多因素預(yù)后分析。
　　 結(jié)果:1、采用Kaplan-Meier方法,對(duì)病例隨訪資料進(jìn)行生存分析,NSCLC手術(shù)后生存期與TNM臨床分期明顯相關(guān),分期越晚,生存率越低,差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；Ⅰ、Ⅱ與Ⅲ期

15、兩兩比較亦具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),NSCLC與腫塊大小亦明顯相關(guān),腫塊直徑大于3cm者術(shù)后生存期低于小于3cm者,具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)；結(jié)果亦顯示術(shù)后生存期高M(jìn)VD值組明顯低于低MVD組,VEGF表達(dá)陽(yáng)性組明顯低于VEGF表達(dá)陰性組,差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。2、將MVD值、VEGF表達(dá)情況及患者年齡、性別、組織類型等臨床生物學(xué)特征采用COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行分析,顯示MVD高表達(dá)組患者術(shù)后

16、死亡的相對(duì)危險(xiǎn)度是MVD低表達(dá)組患者的34.247倍(似然比檢驗(yàn),P<0.01),MVD值是影響NSCLC預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)指標(biāo)。
　　 結(jié)論:VEGF的表達(dá)、MVD值與NSCLC的5年生存率密切相關(guān)。檢測(cè)VEGF和MVD可以作為判斷NSCLC的腫瘤血管生成、腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為和預(yù)后的指標(biāo),MVD是NSCLC的獨(dú)立預(yù)后預(yù)測(cè)因子。
　　 第三部分
　　 低分子肝素對(duì)人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞VEGF表達(dá)的影

17、響
　　 目的:通過(guò)研究LMWH對(duì)A549細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響,探討LMWH對(duì)A549細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移潛能的影響,為L(zhǎng)MWH防治NSCLC提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:1.觀察LMWH對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響。通過(guò)使用不同劑量LMWH處理A549細(xì)胞株,動(dòng)態(tài)觀察A549細(xì)胞生長(zhǎng)情況,采用MTT法檢測(cè)其增殖抑制情況,分析LMWH抗腫瘤效應(yīng)。2.觀察LMWH對(duì)A549細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響。不同劑量LMWH處理A549細(xì)胞株,