血管內(nèi)皮生長因子與人非小細胞肺癌的相關(guān)性研究.pdf

1、[研究背景]
　　 肺癌是當今世界上嚴重威脅人類生命與健康的最常見的惡性腫瘤之一,已成為各種癌癥死亡的首要因為。其中約80％為非小細胞肺癌(non-small cell lungcancer,NSCLC)。80％的NSCLC患者在確診時已屬晚期,失去手術(shù)機會。
　　 NSCLC的治療主要包括手術(shù)、化療、放療和分子靶向治療,無論是何種治療都需要一個指導(dǎo)和評判NSCLC治療效果的有效指標。
　　 目前臨床廣泛采用的評

2、價指標是TNM分期,這個分期固然為臨床NSCLC的治療和預(yù)后判斷提供了一定的指導(dǎo)價值。但是在臨床工作中經(jīng)常發(fā)現(xiàn)在各個分期中有部分患者的預(yù)后與預(yù)期的不同。臨床有相當一部分NSCLC患者(如:Ⅰ期NSCLC患者,術(shù)后5年生存率僅為60％-70％),盡管都得到了早期的診斷和治療,但結(jié)果卻短期內(nèi)出現(xiàn)了復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,無疑這些患者的腫瘤在生物學(xué)行為特點方面表現(xiàn)為更具有侵襲性。因此,單純以TNM分期來判斷肺癌預(yù)后和指導(dǎo)治療顯然是不夠的。
　　

3、近年來研究發(fā)現(xiàn),從肺癌的早期發(fā)生如支氣管上皮增生到腫癌生長、侵襲、轉(zhuǎn)移和預(yù)后復(fù)發(fā)都與血管生成有關(guān)。和其他實體瘤一樣,新生血管為肺癌提供營養(yǎng)物質(zhì),促進腫瘤的生長,也是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的前提。腫瘤血管的生成涉及到多種基因的突變和不同細胞因子及受體的表達,受正負兩方面因素的調(diào)控。在腫瘤組織,由于促血管生成因子和抗血管生成因子二者之間平衡失調(diào),血管生成促進因子占優(yōu)勢。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是目前所知的作用最強的促血管生成因子,參與血管生成的多

4、個環(huán)節(jié)。在促進腫瘤微血管生成中起著關(guān)鍵作用。NSCLC組織中VEGF的表達及腫瘤微血管密度(MVD)可能與NSCLC的生物學(xué)行為及預(yù)后相關(guān),針對VEGF及其受體的靶向治療有可能成為NSCLC的一種新的治療途徑。
　　 1983年Folkman首先提出肝素具有血管生成抑制作用。國外學(xué)者晚近研究發(fā)現(xiàn),低分子肝素(LMWH)在改善腫瘤患者生活質(zhì)量,提高患者生存期等方面起著積極作用,推測LMWH可能干擾腫瘤細胞向血管內(nèi)膜的黏連與侵襲、腫

5、瘤的血管生成等環(huán)節(jié)。
　　 目前有關(guān)肺癌組織中VEGF的表達和MVD的相關(guān)性及二者與肺癌臨床分期、病理分型等的關(guān)系方面的研究及LMWH對人NSCLCA549細胞表達VEGF的影響的體外研究國內(nèi)外報道尚少。本研究擬對此分別進行探討。(1)運用免疫組化方法檢測VEGF在肺癌中的表達并測定微血管密度(MVD),并結(jié)合肺癌臨床病理學(xué)特征及預(yù)后進行分析,探討VEGF表達與NSCLC腫瘤組織MVD的相關(guān)性；(2)通過分析VEGF表達及MVD

6、與肺癌臨床病理學(xué)特征及預(yù)后的關(guān)系,試圖尋找對非小細胞肺癌的診斷和預(yù)后判斷有價值的腫瘤標記物,為臨床提供依據(jù)；(3)采用熒光定量-PCR(real-time PCR)等方法探討LMWH對人非小細胞肺癌A549細胞血管內(nèi)皮細胞生長因子表達水平的影響,為臨床應(yīng)用LMWH治療NSCLC提供實驗支持和理論依據(jù)。
　　 第一部分
　　 血管內(nèi)皮生長因子在非小細胞肺癌中的表達及與血管生成的相關(guān)性研究
　　 目的:研究血管內(nèi)皮生

7、長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在非小細胞肺癌組織中的表達,同時探討VEGF對NSCLC血管生成的影響及兩者之間可能具有的相關(guān)性,并探討它們與非小細胞肺癌(non small cell lungcancer,NSCLC)生物學(xué)行為的關(guān)系。
　　 方法:選用1996年1月至1999年1月蚌埠醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心胸外科手術(shù)切除并經(jīng)病理學(xué)確診的43例非小細胞肺癌癌組織,應(yīng)用免疫組織化

8、學(xué)S-P法檢測組織中的VEGF的表達,并對組織中的血管進行染色、計數(shù)。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計處理。數(shù)值變量資料均以x±s表示,分別采用t檢驗,單因素方差分析對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計分析。分類變量資料采用X2檢驗。
　　 結(jié)果:1、在43例NSCLC中VEGF表達陽性者23例,陽性表達率為53.50％(23/43)；43例NSCLC的MVD均值為31.98+14.93。2、NSCLC中10例腺癌組織VEGF的陽性表達率為

9、50％(5/10),33例鱗癌組織VEGF的陽性表達率為59.4％(18/33);經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析二者之間的差異無顯著性(P>0.05)。MVD的均值在磷癌中為30.91±15.25,腺癌中為35.50±15.28,二者之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。3、VEGF在Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期NSCLC中的陽性表達率分別為12.50％,66.67％和91.67％,臨床中晚期(Ⅲ期)陽性表達率顯著高于臨床早期(Ⅰ期,Ⅱ期)(P<0.01)；MVD

10、的均值在Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期NSCLC中分別為21.25±7.86,32.87±15.27和45.17±11.49,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。4、根據(jù)有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,把43例NSCLC分為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移兩組。在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF陽性表達率為11.11％(2/18),在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組VEGF陽性表達率為84.00％(21/25),有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MVD值分別為39.56±14.73和21.44±7.44,在兩組

11、間 VEGF陽性表達率、MVD值差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。5、在NSCLC組織中,VEGF表達陽性組的MVD為42.83±11.92,陰性組的MVD為19.50±5.73,二者相比差異有顯著性(P<0.01)。
　　 結(jié)論:1、VEGF在NSCLC組織中高表達。VEGF的表達與NSCLC的瘤體大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān),而與NSCLC的組織學(xué)分類無關(guān)。2、NSCLC組織中MVD值與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤細胞分化程度

12、及TNM分期有關(guān),NSCLC組織中血管生成活躍,微血管密度明顯增高。血管生成與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展過程有著密切的聯(lián)系。3、VEGF的陽性表達與NSCLC中的MVD值呈顯著正相關(guān),VEGF正向調(diào)節(jié)NSCLC的血管生成,以VEGF或其受體為靶點將有望成為非小細胞肺癌新的治療途徑。
　　 第二部分
　　 血管內(nèi)皮生長因子、微血管密度與人非小細胞肺癌患者預(yù)后的相關(guān)性研究
　　 目的:研究血管內(nèi)皮生長因子(vascula

13、r endothelial growth factor,VEGF)在非小細胞肺癌組織中的表達,同時探討VEGF對NSCLC血管生成的影響及兩者之間可能具有的相關(guān)性,并探討它們與非小細胞肺癌(non small cell lungcancer,NSCLC)生物學(xué)行為及預(yù)后的關(guān)系,為肺癌的臨床診斷、預(yù)測轉(zhuǎn)移和治療提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法:選用1996年1月至1999年1月蚌埠醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心胸外科手術(shù)切除并經(jīng)病理學(xué)確診的43例非小

14、細胞肺癌癌組織,應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法檢測組織中的VEGF的表達,并對組織中的血管進行染色、計數(shù)。采用Kalpan-Meier方法,對病例隨訪資料進行生存分析并經(jīng)Log-rank檢驗；COX模型(似然比檢驗)用于多因素預(yù)后分析。
　　 結(jié)果:1、采用Kaplan-Meier方法,對病例隨訪資料進行生存分析,NSCLC手術(shù)后生存期與TNM臨床分期明顯相關(guān),分期越晚,生存率越低,差異有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；Ⅰ、Ⅱ與Ⅲ期

15、兩兩比較亦具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),NSCLC與腫塊大小亦明顯相關(guān),腫塊直徑大于3cm者術(shù)后生存期低于小于3cm者,具有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)；結(jié)果亦顯示術(shù)后生存期高MVD值組明顯低于低MVD組,VEGF表達陽性組明顯低于VEGF表達陰性組,差異有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。2、將MVD值、VEGF表達情況及患者年齡、性別、組織類型等臨床生物學(xué)特征采用COX比例風(fēng)險回歸模型進行分析,顯示MVD高表達組患者術(shù)后

16、死亡的相對危險度是MVD低表達組患者的34.247倍(似然比檢驗,P<0.01),MVD值是影響NSCLC預(yù)后的一個獨立危險指標。
　　 結(jié)論:VEGF的表達、MVD值與NSCLC的5年生存率密切相關(guān)。檢測VEGF和MVD可以作為判斷NSCLC的腫瘤血管生成、腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為和預(yù)后的指標,MVD是NSCLC的獨立預(yù)后預(yù)測因子。
　　 第三部分
　　 低分子肝素對人非小細胞肺癌A549細胞VEGF表達的影

17、響
　　 目的:通過研究LMWH對A549細胞VEGF表達的影響,探討LMWH對A549細胞侵襲、轉(zhuǎn)移潛能的影響,為LMWH防治NSCLC提供實驗依據(jù)。
　　 方法:1.觀察LMWH對A549細胞增殖的影響。通過使用不同劑量LMWH處理A549細胞株,動態(tài)觀察A549細胞生長情況,采用MTT法檢測其增殖抑制情況,分析LMWH抗腫瘤效應(yīng)。2.觀察LMWH對A549細胞VEGF表達的影響。不同劑量LMWH處理A549細胞株,