血管內(nèi)皮生長因子與血管新生和小細胞肺癌增殖關(guān)系的研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文血管內(nèi)皮生長因子與血管新生和小細胞肺癌增殖關(guān)系的研究姓名：虞正鑫申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：石文君20040301期、淋巴轉(zhuǎn)移情況。隨訪持續(xù)到2003年12月，對21例病人術(shù)后隨訪20個月，其中15例發(fā)生復(fù)發(fā)或遠處轉(zhuǎn)移。12分組：由于病例有限，將I、Ⅱ期歸為臨床早期，Ⅲ、Ⅳ歸為臨床晚期；瘤體大小以3cm為界分兩組；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為轉(zhuǎn)移組余為非轉(zhuǎn)移組。13對照：8份肺部良性腫瘤組織石蠟包埋標本。2免疫組化

2、方法檢測VEGF表達采用S—P法染色，步驟如下：石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，內(nèi)源性過氧化物酶阻斷10分鐘，高溫高壓抗原修復(fù)，非免疫動物血清溫育20分鐘(37℃)，一抗溫育過夜(4℃)，二抗溫育20分鐘(37℃)，鏈親和素——過氧化物酶溫育30分鐘(37℃)，，DAB2—5分鐘顯色，蘇木素對比染色后，脫水，透明，封片。光鏡下觀察，同時觀察癌旁組織并記錄。以PBS代替一抗作陰性對照，已知陽性切片同一條件下染色為陽性對照。陽性細胞染色為棕黃色顆粒或

3、團塊，特異性位于細胞漿或細胞膜。計算每例切片5個高倍視野中陽性染色反應(yīng)細胞的百分率。綜合染色強度及分布范圍進行半定量處理：染色強度分無著色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分。分布范圍分陽性細胞數(shù)2即為陽性。VEGF評分分級：0—2分為陰性，3—4分為低級，5—6分為高級。3腫瘤內(nèi)微血管密度(iMVD)按文獻用Weidener方法計數(shù)?？笴D34單抗表達于血管內(nèi)皮細胞。每一標本先在低倍鏡X100(X10物鏡和X10目鏡)下選3個微血

4、管數(shù)最多的區(qū)域即“亮點”，在每一亮點中計數(shù)高倍鏡X200(X10目鏡和X20物鏡)下的微血管數(shù)，取其3個均值計為iMVC。4流式細胞術(shù)單細胞懸液的制備：取33例SCLC患者標本，先將石蠟包埋組織切成40一50斗m厚的切片，二甲苯脫蠟；依次置入100％，90％，70％，50％的乙醇中水化，每步10分鐘；去乙醇，加入3～5毫升蒸餾水，漂洗3—5分鐘后棄上清；加入O5％胃蛋白酶消化液5毫升，置37℃水浴30分鐘，5—10分鐘震蕩一次；加入生理