血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與血管新生和小細(xì)胞肺癌增殖關(guān)系的研究.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與血管新生和小細(xì)胞肺癌增殖關(guān)系的研究姓名：虞正鑫申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：石文君20040301期、淋巴轉(zhuǎn)移情況。隨訪持續(xù)到2003年12月，對(duì)21例病人術(shù)后隨訪20個(gè)月，其中15例發(fā)生復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。12分組：由于病例有限，將I、Ⅱ期歸為臨床早期，Ⅲ、Ⅳ歸為臨床晚期；瘤體大小以3cm為界分兩組；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為轉(zhuǎn)移組余為非轉(zhuǎn)移組。13對(duì)照：8份肺部良性腫瘤組織石蠟包埋標(biāo)本。2免疫組化

2、方法檢測(cè)VEGF表達(dá)采用S—P法染色，步驟如下：石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，內(nèi)源性過氧化物酶阻斷10分鐘，高溫高壓抗原修復(fù)，非免疫動(dòng)物血清溫育20分鐘(37℃)，一抗溫育過夜(4℃)，二抗溫育20分鐘(37℃)，鏈親和素——過氧化物酶溫育30分鐘(37℃)，，DAB2—5分鐘顯色，蘇木素對(duì)比染色后，脫水，透明，封片。光鏡下觀察，同時(shí)觀察癌旁組織并記錄。以PBS代替一抗作陰性對(duì)照，已知陽(yáng)性切片同一條件下染色為陽(yáng)性對(duì)照。陽(yáng)性細(xì)胞染色為棕黃色顆?；?/p>

3、團(tuán)塊，特異性位于細(xì)胞漿或細(xì)胞膜。計(jì)算每例切片5個(gè)高倍視野中陽(yáng)性染色反應(yīng)細(xì)胞的百分率。綜合染色強(qiáng)度及分布范圍進(jìn)行半定量處理：染色強(qiáng)度分無(wú)著色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分。分布范圍分陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)2即為陽(yáng)性。VEGF評(píng)分分級(jí)：0—2分為陰性，3—4分為低級(jí)，5—6分為高級(jí)。3腫瘤內(nèi)微血管密度(iMVD)按文獻(xiàn)用Weidener方法計(jì)數(shù)?？笴D34單抗表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞。每一標(biāo)本先在低倍鏡X100(X10物鏡和X10目鏡)下選3個(gè)微血

4、管數(shù)最多的區(qū)域即“亮點(diǎn)”，在每一亮點(diǎn)中計(jì)數(shù)高倍鏡X200(X10目鏡和X20物鏡)下的微血管數(shù)，取其3個(gè)均值計(jì)為iMVC。4流式細(xì)胞術(shù)單細(xì)胞懸液的制備：取33例SCLC患者標(biāo)本，先將石蠟包埋組織切成40一50斗m厚的切片，二甲苯脫蠟；依次置入100％，90％，70％，50％的乙醇中水化，每步10分鐘；去乙醇，加入3～5毫升蒸餾水，漂洗3—5分鐘后棄上清；加入O5％胃蛋白酶消化液5毫升，置37℃水浴30分鐘，5—10分鐘震蕩一次；加入生理