通過(guò)RNA干擾技術(shù)抑制人非小細(xì)胞肺癌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因表達(dá)的研究.pdf

1、2∞6屆研究生碩士學(xué)位論文Y896178學(xué)校代碼：1舵69學(xué)號(hào)：YS03261嘶2纂褒蹄筋麓擎通過(guò)瑚悄干擾技術(shù)抑制人非小細(xì)胞肺癌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因表達(dá)的研究院系：生盒掛堂堂院專業(yè)：：壘塑焦堂皇筮王生塑堂方向：盆i盎痤堂研究生：矗量選指導(dǎo)老師：童堊副麴援垡昱夔援2∞6年5月完成通過(guò)RNA干擾技術(shù)抑制人非小細(xì)胞肺癌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因表達(dá)的研究院系：生金科堂堂菹專業(yè)：生塑焦堂皇筮王生塑生方向：盆王魚逛堂研究生：直亟越指導(dǎo)老師：童王副麴援垡

2、星熬援摘要肺癌是嚴(yán)重危害生命的惡性腫瘤，盡管目前的醫(yī)療水平已經(jīng)有了很大的提高，但是肺癌的治愈率仍然低于10％。腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是其最本質(zhì)的生物學(xué)特征，也是導(dǎo)致治療失敗和死亡的根本原因。血管新生是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的先決條件。因此，抑制腫瘤血管新生，切斷腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的所依賴的“命脈”已經(jīng)成為當(dāng)前腫瘤治療的一個(gè)重要的策略。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascularendothelialgrowtllfactor，VEGF)是生物體內(nèi)調(diào)控血管生長(zhǎng)的一個(gè)

3、主要的調(diào)控因子。很多研究表明，在肺癌組織中血管生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)直接影響著肺癌腫瘤血管的生長(zhǎng)和原發(fā)病的生長(zhǎng)與浸潤(rùn)。所以，通過(guò)抑制肺癌腫瘤細(xì)胞中ⅦGF基因的表達(dá)，有可能起到抑制肺癌組織的生長(zhǎng)和遷移。因此，在本課題的研究中，我們選擇VEGF作為目的基因，嘗試通過(guò)PCR擴(kuò)增產(chǎn)生siRNA表達(dá)框的方法表達(dá)sjRNA分子，利用siRNA分子抑制vEGF在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和本課題組構(gòu)建的荷瘤裸鼠腫瘤組織中的表達(dá)，從而為肺癌基因治療

4、提供新的研究思路和方法。在腫瘤基因治療的研究中，基因的傳遞載體是其中的一個(gè)重要組成部分。目前大多數(shù)采用的病毒載體和非病毒載體在使用中都存在著諸多問(wèn)題。在本謀題的研究過(guò)程中，我們采用日本NDT公司研制的非病毒陽(yáng)離子聚合載體CvtoPurecnln作為外源基因的傳遞載體。在體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，我們通過(guò)不斷優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，使其在體外塒人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率達(dá)到40％。接蓿，我們以vEGF基因編碼區(qū)為靶點(diǎn)，設(shè)計(jì)相應(yīng)的siRNA