圍生期雙酚A暴露對(duì)仔鼠調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響.pdf

1、研究背景:雙酚A(bispheno1A,BPA)是生產(chǎn)碳酸聚酯、塑料制品等工業(yè)產(chǎn)品的原材料,用于奶瓶、可重復(fù)用水杯、牙密封劑、食品與飲料的包裝材料、水管、熱敏紙、卡板紙及其他產(chǎn)品的添加劑等制造。據(jù)報(bào)道,2008年BPA一年的產(chǎn)量高達(dá)80億磅,而且以每年6％～10%的速度增長(zhǎng)。BPA在高溫、聚合不完全、長(zhǎng)期使用等情況下通過(guò)酯鍵水解而釋放,導(dǎo)致人群及動(dòng)物的慢性低劑量暴露。
　　BPA具有擬雌激素作用,通過(guò)干擾雌激素活性等途徑對(duì)人體多個(gè)

2、系統(tǒng)如內(nèi)分泌、生殖、發(fā)育等產(chǎn)生有害作用,而孕期及生命早期(包括嬰幼兒期、青春期等)暴露BPA,可能與發(fā)育期免疫功能異常及相關(guān)疾病有關(guān),這引起了廣泛的關(guān)注。流行病學(xué)研究提示,生命早期暴露如BPA等內(nèi)分泌干擾物可能是過(guò)去幾十年發(fā)達(dá)國(guó)家兒童哮喘、過(guò)敏性皮炎、糖尿病、兒童腫瘤發(fā)病率上升的原因之一。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)圍生期或成年期BPA等內(nèi)分泌干擾物暴露誘導(dǎo)的免疫毒性的研究越趨增多,但至今BPA暴露引起的免疫發(fā)育毒性機(jī)制尚未完全闡明。Treg細(xì)胞對(duì)機(jī)體發(fā)

3、揮維持免疫穩(wěn)態(tài)和免疫負(fù)性調(diào)控的關(guān)鍵作用,有報(bào)道稱成年期BPA暴露能抑制Treg細(xì)胞數(shù)量,使T/B細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等應(yīng)答過(guò)度,導(dǎo)致免疫功能異常及免疫性疾病。本課題組假設(shè)母鼠孕期及哺乳期BPA暴露,誘導(dǎo)的仔鼠免疫功能的異常與失衡,可能與BPA抑制Treg細(xì)胞數(shù)量這一途徑有關(guān)。
　　研究目的:通過(guò)檢測(cè)孕期和哺乳期經(jīng)水暴露不同劑量BPA母鼠所生仔鼠斷乳期及青春期脾臟Treg細(xì)胞數(shù)量、特征性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3mRNA表達(dá)水平及血清中IL-10

4、、TGF-β含量,結(jié)合仔鼠生長(zhǎng)發(fā)育狀況,探討圍生期BPA暴露對(duì)子代Treg細(xì)胞的影響。
　　研究方法:選用SPF級(jí)8周齡ICR雌鼠、9周齡ICR雄鼠;適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,按照雌:雄比例2:1合籠交配,雌鼠查到陰栓確認(rèn)為妊娠,將孕鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、溶劑對(duì)照組(DMSO)、BPA低中高劑量組(2.2829、22.829、228.29μg/L)。母鼠自妊娠開(kāi)始日(GD0)至仔鼠斷乳(PND21)經(jīng)飲水暴露BPA,PND21與PND42處

5、死仔鼠,收集外周血并取脾臟;流式細(xì)胞儀檢測(cè)仔鼠脾臟Treg細(xì)胞數(shù)量;熒光定量RT-PCR檢測(cè)脾臟Treg細(xì)胞特征性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3mRNA表達(dá)水平;ELISA檢測(cè)血清中IL-10、TGF-β含量;使用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
　　結(jié)果:
　　1.一般情況母鼠孕期狀況良好,未出現(xiàn)死亡、流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)等情況;組間飲水量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,約為0.12ml/(g?d);母鼠孕期體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。仔鼠出生性別比及

6、平均窩仔數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;僅PND42時(shí)高劑量組仔鼠體重較空白對(duì)照組有顯著增加(P<0.05),其余各時(shí)點(diǎn)各組間仔鼠體重差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.圍生期BPA暴露對(duì)仔鼠Treg細(xì)胞的影響
　　2.1對(duì)仔鼠脾臟Treg細(xì)胞數(shù)量的影響圍生期BPA暴露后仔鼠脾臟Treg細(xì)胞數(shù)量隨母鼠BPA暴露劑量的增加而呈下降趨勢(shì)。PND21時(shí)中、高劑量組Treg細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)

7、,而低劑量組則無(wú)明顯差異;PND42時(shí)各組間Treg細(xì)胞數(shù)量均無(wú)明顯差異,BPA暴露組仔鼠Treg細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比則表現(xiàn)為輕微下降,但與PND21相比,BPA暴露組Treg細(xì)胞數(shù)量均所有回升。
　　2.2對(duì)仔鼠脾臟Foxp3mRNA表達(dá)的影響暴露組仔鼠Foxp3mRNA表達(dá)水平隨母鼠BPA暴露劑量的增加而呈下降趨勢(shì)。PND21時(shí)中、高劑量組Foxp3mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組相比有明顯降低(P<0.05,P<0.01),而低劑量

8、組則無(wú)明顯差異;PND42時(shí)各組間Foxp3mRNA表達(dá)水平相比均無(wú)明顯差異,與對(duì)照組相比,BPA暴露組表現(xiàn)為輕微下降,但與PND21時(shí)相比,BPA暴露組Foxp3mRNA表達(dá)水平均所有回升。
　　3.對(duì)Treg細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的影響
　　3.1對(duì)仔鼠血清IL-10水平的影響PND21時(shí)高中低劑量組仔鼠血清IL-10含量隨劑量增加而逐漸下降,高劑量組IL-10含量與對(duì)照組相比有顯著降低(P<0.05),低、中劑量組與對(duì)照組相

9、比雖有降低但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;PND42時(shí)各組仔鼠血清IL-10含量均無(wú)顯著差異,暴露組與對(duì)照組相比均有減少,與PND21相比則均有所回升。
　　3.2對(duì)血清TGF-β水平的影響PND21時(shí)高中低劑量組仔鼠血清TGF-β含量隨劑量增加而逐漸上升,高、中劑量組TGF-β含量與對(duì)照組相比有顯著增加(P<0.05,P<0.01),低劑量組與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;PND42時(shí)低、中、高劑量組與對(duì)照組相比呈逐漸增加,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意

10、義,與PND21相比則5組均有下降,而暴露組下降幅度更為明顯。
　　4.仔鼠血清IL-10、TGF-β水平與Treg細(xì)胞數(shù)量的相關(guān)性相關(guān)性分析顯示仔鼠血清IL-10含量與Treg細(xì)胞數(shù)量之間存在不顯著正相關(guān);而TGF-β含量與Treg細(xì)胞數(shù)量之間存在顯著負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.圍生期BPA暴露對(duì)孕鼠、斷乳前仔鼠體重?zé)o明顯影響。
　　2.圍生期暴露BPA降低仔鼠斷乳期Treg細(xì)胞數(shù)量及Foxp3mRNA表達(dá)水