食品源性雙酚A暴露對腦發(fā)育和功能的影響及機理研究.pdf

1、雙酚A(Bisphenol-A，BPA)是一種廣泛存在的環(huán)境雌激素干擾劑，并兼有擬雌激素、抗雌激素和抗雄激素活性。它既可以與雌激素受體結(jié)合，也可以與膜表面的非雌激素受體結(jié)合，從而干擾正常的生理活動。由于內(nèi)源性激素對腦發(fā)育及功能都十分重要，因此雙酚A被認(rèn)為可影響腦發(fā)育及腦功能，進(jìn)而影響人及動物的相關(guān)行為。但雙酚A影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的具體分子機制目前尚不是很清楚，甚至存在一些爭議。
　　目的：探究發(fā)育期雙酚A暴露對SD鼠海馬CA1及DG

2、區(qū)樹突棘形態(tài)的影響，并從Wnt信號通路的角度闡述可能的分子機制;探究慢性雙酚A暴露對成年鼠自主行為及空間記憶的影響，并研究了這種影響是否與多巴胺系統(tǒng)及組蛋白的表觀遺傳修飾有關(guān)。
　　方法：1.從整體動物及培養(yǎng)的離體海馬神經(jīng)元兩方面研究了發(fā)育期雙酚A暴露對海馬樹突棘的影響。整體動物雙酚A暴露劑量為50μg/kg/d、250μg/kg/d、500μg/kg/d，暴露時間為SD鼠出生7-14天，暴露方式為腹腔注射。離體海馬神經(jīng)元雙酚A暴

3、露劑量10nM、100nM、1μM、10μM，暴露時間是細(xì)胞培養(yǎng)至第14天雙酚A暴露2小時。Golgi-cox染色觀察在體海馬神經(jīng)細(xì)胞的樹突棘形態(tài)，慢病毒轉(zhuǎn)染EGFP、激光共聚焦顯微鏡拍攝觀察離體海馬神經(jīng)元的樹突棘形態(tài)。Western blot檢測Wnt蛋白的表達(dá)量。2.雙酚A慢性暴露實驗:子鼠自母鼠懷孕開始接受BPA暴露一直到成年，在其第8周進(jìn)行曠場試驗，12周時進(jìn)行水迷宮實驗，Golgi-cox染色觀察雙酚A暴露后海馬神經(jīng)細(xì)胞的樹突

4、棘形態(tài)，Western blot檢測多巴胺系統(tǒng)相關(guān)蛋白及組蛋白、乙酰化的組蛋白的表達(dá)量,PCR檢測相關(guān)蛋白基因的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.整體動物及離體海馬神經(jīng)元發(fā)育期BPA暴露會顯著降低海馬CA1及DG區(qū)樹突棘密度，Wnt7a表達(dá)下降，Wnt5a表達(dá)上升，β-catenin磷酸化程度升高。外源性Wnt7a細(xì)胞因子可修復(fù)雙酚A造成的樹突棘損傷，并降低β-catenin磷酸化程度。2.雙酚A慢性暴露導(dǎo)致SD雄鼠出現(xiàn)多動行為，損傷SD雄鼠

5、及雌鼠的空間記憶，降低海馬CA1區(qū)的樹突棘密度。雙酚A暴露使多巴胺轉(zhuǎn)運體DAT1及多巴胺受體DRD4蛋白及mRNA水平都顯著下降，高劑量組(50mg/L)組蛋白H3的乙酰化程度明顯升高，進(jìn)一步的研究表明，高劑量組去乙酰化酶HDAC1明顯降低從而使組蛋白乙?；潭忍岣摺?br>　　結(jié)論：1.發(fā)育期雙酚A暴露可損傷海馬CA1及DG區(qū)樹突棘形成，導(dǎo)致樹突棘密度降低。Wnt信號通路可能參與了BPA致樹突棘損傷這一過程。其中，BPA可能通過靶點W