山茱萸總苷及多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌梗死大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制探析.pdf

1、研究背景： 急性心肌梗死是指冠狀動(dòng)脈急性閉塞，冠狀動(dòng)脈供血急劇減少或中斷，使相應(yīng)區(qū)域的心肌發(fā)生嚴(yán)重而持久的缺血，缺氧的病癥，臨床上死亡率高，是臨床危重疾病之一。西藥及介入治療的研究較多，而中醫(yī)中藥治療冠心病的研究主要集中在活血化瘀法及相關(guān)類藥物上。根據(jù)中醫(yī)對(duì)冠心病的認(rèn)識(shí)，冠心病屬中醫(yī)胸痹、真心痛范疇。其病機(jī)為本虛標(biāo)實(shí)，本虛主要包括氣、血、陰、陽(yáng)之虛，標(biāo)實(shí)則為瘀血、寒凝、痰濁、氣滯諸證。正如《黃帝內(nèi)經(jīng)》云：“腎虛者……虛則胸中痛。

2、”腎為人體先天之本，藏納腎精，主人體一身陰陽(yáng)之根本。而心腎同屬少陰，經(jīng)絡(luò)相連，腎陽(yáng)虛則心失溫煦，心陽(yáng)不振，鼓動(dòng)無(wú)力，血行遲緩，痹阻心脈；腎陰不足，則心失濡潤(rùn)，滋生內(nèi)熱，營(yíng)陰暗耗，脈絡(luò)空虛，血流滯澀，灼津?yàn)樘?，閉阻脈絡(luò)，心脈不通，胸陽(yáng)失展，發(fā)為胸痹。故依此理論，從補(bǔ)腎強(qiáng)心出發(fā)，在臨床上治療冠心病收到肯定療效，但目前對(duì)此深層次的機(jī)制研究尚不多。中藥山茱萸具有補(bǔ)益肝腎，澀精固脫的功效，是在補(bǔ)腎強(qiáng)心治法指導(dǎo)下的首選藥。本研究通過探討山茱萸對(duì)于急

3、性心肌梗死大鼠模型的心肌保護(hù)作用，為闡釋心腎相關(guān)理論的本質(zhì)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 目的： 基于中醫(yī)對(duì)冠心病病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)，遵循補(bǔ)腎強(qiáng)心的基本治療原則，探討山茱萸單成分提取物山茱萸總苷及多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)性急性心肌梗死大鼠的保護(hù)作用及其機(jī)制，并比較預(yù)防給藥和治療給藥二者的療效區(qū)別，從氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)兩方面探明作用機(jī)制，為臨床運(yùn)用山茱萸治療冠心病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 將60只SD大鼠，采用結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈左前降支(LAD

4、)的方法建立急性心肌梗死模型，術(shù)后24小時(shí)存活的38只隨機(jī)分為模型組，山茱萸總苷治療組，山茱萸多糖治療組，另外36只SD大鼠隨機(jī)分為兩部分，設(shè)為假手術(shù)組和預(yù)防給藥組，其中假手術(shù)組僅在冠脈相同部位穿線不結(jié)扎，其余四組均在相同部位結(jié)扎冠脈。各組設(shè)立相同的觀察起點(diǎn)和終點(diǎn)，均在第8天造模，術(shù)前或者術(shù)后給藥7天，總的觀察時(shí)間為15天。最終58只大鼠獲取完整資料，上述各組例數(shù)分別為10，12，12，12和12只。觀察結(jié)束后，每組隨機(jī)抽取一半的動(dòng)物行

5、超聲心動(dòng)圖及血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)評(píng)價(jià)心功能，然后腹主動(dòng)脈取血檢測(cè)血清MDA、SOD、MPO及GSH—Px含量，并同時(shí)留取心臟標(biāo)本，行組織病理學(xué)檢測(cè)及Masson三色染色心肌梗死面積測(cè)定，免疫組化半定量分析心肌組織中的炎癥因子IL—6和IL-10的表達(dá)。每組剩下的半數(shù)動(dòng)物留取活組織標(biāo)本液氮保存以待后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 結(jié)果： 超聲心動(dòng)圖與假手術(shù)組比，模型組左室收縮內(nèi)徑(LVDs)、左室舒張內(nèi)徑(LVDd)、左室收縮末容積(LVESV)、左

6、室舒張末容積(LVEDV)顯著增加(P<0.05)。而短軸縮短率(FS)及射血分?jǐn)?shù)(EF)卻顯著下降(P<0.05)。山茱萸治療各組別均能顯著降低左室收縮內(nèi)徑、左室舒張內(nèi)徑及左室舒張末容積(P<0.05)，而僅有預(yù)防給藥組能顯著降低左室收縮末容積(P<0.05，與模型組比)。室間隔厚度，左室壁厚度在各組之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 血流動(dòng)力學(xué)與模型組比較，山茱萸各組的左室收縮壓(LVSP)顯著上升(P<0.05)；左室內(nèi)壓

7、最大下降速率(—dp/dt)、左室舒張末壓(LVEDP)顯著降低(P<0.05)；而心率及左室內(nèi)壓最大上升速率(+dp/dt)與模型組的比較未見顯著性差異。 組織病理學(xué)及梗死面積假手術(shù)組心肌組織HE染色后可見肌束飽滿，胞漿呈現(xiàn)均勻紅色，細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。而模型組心肌組織HE染色后可見梗死區(qū)域呈現(xiàn)著色淡，心肌纖維細(xì)胞明顯減少，心肌纖維溶解，橫紋消失或斷裂，膠原間質(zhì)纖維增生明顯，梗死灶內(nèi)及周圍有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等。M

8、asson三色染色后，梗死的組織因間質(zhì)膠原纖維增多呈現(xiàn)綠色，定量分析顯示，與模型組比較，山茱萸各組能顯著縮小心肌梗死面積，分別是28.72±2.36、26.58±1.78、26.18±1.38 vs34.50±5.06(P<0.05)，且山茱萸各組心肌組織的HE染色可見心肌問質(zhì)增生減少，壞死減輕，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少。 血清生化標(biāo)志物與模型組比較，山茱萸各組MDA含量顯著下降(P<0.05)，且山茱萸總苷和多糖的組間比較沒有差異；而

9、山茱萸各組能顯著升高SOD含量(P<0.05)，以多糖治療的效果最好；MPO的含量以模型組最高，經(jīng)山茱萸治療后，各治療組的MPO含量均顯著下降(P<0.05)，各成分的組間比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)；而GSH—Px，與假手術(shù)組比較，模型組的含量顯著下降(P<0.05)，經(jīng)山茱萸各成分治療后，各組GSH—Px含量升高，且較模型組比較有顯著性差異(P<0.05)。 心肌組織炎癥因子免疫組化定位染色顯示，AMI后心肌組織炎性細(xì)胞

10、因子的表達(dá)主要位于梗死區(qū)域少量存活的心肌細(xì)胞以及梗死周邊區(qū)、非梗死區(qū)域心肌細(xì)胞的胞漿中。半定量分析結(jié)果顯示，假手術(shù)組可見心肌組織炎癥因子IL—6、IL-10表達(dá)下降，而與之相比模型組IL—6和IL—IO的表達(dá)都不同程度地上升，經(jīng)山茱萸各成分治療后，炎癥因子IL—6的表達(dá)有所下降，而山茱萸多糖可顯著升高IL-10的表達(dá)(P<0.05)。 結(jié)論： 1.山茱萸各成分可以改善急性心肌梗死后心功能； 2.山茱萸各成分可顯著