大腦脂蛋白脂酶的蛋白表達及酶活性在大鼠急性腦缺血-再灌注中的變化.pdf

1、脂蛋白脂酶 (Ifipoprotein lipase，LPL) 是甘油三酯分解代謝的關(guān)鍵酶，具有脂酶活性和分子橋作用，廣泛分布于全身多個組織。近年來多項研究表明，在動物腦梗死、腦損傷和周圍神經(jīng)受損的情況下，損傷組織周圍的LPL mRNA、蛋白及酶活性出現(xiàn)上調(diào)，某些伴LPL活性下降的疾病亦可致神經(jīng)病變，提示LPL在神經(jīng)系統(tǒng)中可能具有重要作用，有學(xué)者推測LPL是通過促進殘余脂質(zhì)的循環(huán)再利用，從而在腦損傷過程中發(fā)揮積極作用，但是尚未見有關(guān)于大

2、腦LPL蛋白及酶活性的變化對急性腦缺血一再灌注的作用的相關(guān)研究。為了解LPL在大腦中的蛋白表達和酶活性以及兩者在急性腦缺血一再灌注后不同時點的變化規(guī)律，本研究以線栓法建立SD大鼠的一側(cè)大腦中動脈閉塞 (middle cerebral arteryocclusion．MCAO)急性缺血一再灌注模型，通過對腦組織的紅四氮唑(2，3，5-triphenyltetrazolium chloride，TTC)染色、細(xì)胞化學(xué)染色、LPL免疫組織化學(xué)

3、反應(yīng)及LPL酶活性的檢測等方法，觀察在正常情況下LPL蛋白在大腦中的表達部位、LPL酶活性，以及在急性腦缺血一再灌注后不同缺血時間點大腦LPL蛋白表達的部位和數(shù)量、LPL酶活性的變化情況，探討大腦LPL在急性腦缺血－再灌注中的作用及可能的影響機制。 材料和方法： 選取年齡為20～25周、體重為280～400克的雄性SD大鼠，共82只，隨機分為正常對照組(control)、假手術(shù)組(sham)、缺血2小時組(Is2h)、缺

4、血4小時組(Is4h)、缺血6小時組(Is6h)、缺血12小時組(Is12h)、缺血24小時組(Is24h)、缺血2小時再灌注2小時組(Is2hRe2h)和缺血4小時再灌注2小時組(Is4hRe2h)，共9個組。缺血組采用改良的Longa法建立右側(cè)MCAO短暫腦缺血－再灌注模型，缺血再灌注組分別在缺血2小時、缺血4小時后拔出部分栓線(約1厘米)行再灌注2小時，缺血組的動物不拔栓線，假手術(shù)組予結(jié)扎右側(cè)頸外動脈，不插栓線。術(shù)中予觀察大鼠的術(shù)

5、前、術(shù)中和術(shù)后體溫、術(shù)前及術(shù)后血糖等生理指標(biāo)。在處死大鼠前對其神經(jīng)體征做神經(jīng)功能缺損評分(采用Longa5分法)，然后按每組的規(guī)定時間處死大鼠，每組各取三只分別做新鮮腦組織TTC染色、用酶標(biāo)儀檢測新鮮腦組織LPL酶活性，另外三只行冰凍切片，用作尼氏(Nissle)染色、蘇木素－伊紅(HE)染色以及檢測LPL蛋白免疫組織化學(xué)反應(yīng)。 結(jié)果： 1．9個組的大鼠體重，術(shù)前、術(shù)后血糖，術(shù)前、術(shù)中、術(shù)后體溫差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0

6、.05)。 2．不同時間缺血各組之間的腦梗死體積百分比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，Is24h組腦梗死體積百分比比Is2h、Is4h組明顯增大(P<0.01，P<0.05)，其余各組比較差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。Is4hRe2h組腦梗死體積百分比明顯大于Is2Re2h組(P<0.01)。腦梗死體積百分比越大，神經(jīng)功能缺損評分越高，兩者呈正相關(guān)(r=0.947，P<0.001)。缺血各組之間的神經(jīng)功能缺損評分差異亦具有統(tǒng)計學(xué)意義(

7、P<0.01)。 3．在正常的大鼠中，LPL免疫組化反應(yīng)顯示皮層、海馬及紋狀體都分布有豐富的LPL蛋白。皮層、海馬區(qū)域LPL蛋白免疫陽性細(xì)胞計數(shù)明顯多于紋狀體區(qū)域(P<0.001，P<0.05)，皮層、海馬區(qū)域LPL蛋白免疫陽性細(xì)胞計數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。毛細(xì)血管內(nèi)皮亦有表達LPL蛋白。 4．Is4h、Is6h、Isl2h組病灶側(cè)的皮層LPL蛋白免疫陽性細(xì)胞計數(shù)均高于正常對照組(P<0.01)；而Is2h、

8、Is24h組與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。缺血再灌注組病灶側(cè)皮層LPL蛋白免疫陽性細(xì)胞計數(shù)高于正常對照組(P<0.05)。Is2hRe2h、Is4hRe2h組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。Is2hRe2h組病灶側(cè)LPL蛋白免疫陽性細(xì)胞計數(shù)高于Is2h組(t=4.745，P=0.009)，Is4h與Is4hRe2h組之間LPL蛋白免疫陽性細(xì)胞計數(shù)沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。病灶側(cè)的皮層LPL蛋白免疫陽性細(xì)

9、胞計數(shù)與缺血時間呈正相關(guān)(r=0.650，P<0.05)，從缺血4小時開始升高，缺血6小時達高峰，維持到缺血12小時后逐漸下降，缺血24小時回復(fù)至正常水平。 5．除Is2h組外，其余缺血組兩側(cè)大腦LPL酶活性的差值均高于正常對照組(P<0.05)。不同時間缺血各組之間的兩兩比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。Is2hRe2h、Is4hRe2h組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。Is2h與Is2hRe2h組、Is4h與I

10、s4hRe2h組之間LPL酶活性比較差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。兩側(cè)大腦LPL酶活性的差值與缺血時間呈正相關(guān)(r=0.704，P<0.001)。從缺血4小時開始升高，缺血6小時升高最明顯，隨缺血時間延長酶活性逐漸下降，缺血24小時逐漸平穩(wěn)，但仍高于正常水平。 6．病灶側(cè)大腦皮層LPL蛋白免疫陽性細(xì)胞數(shù)與神經(jīng)功能缺損評分呈正相關(guān)(r=0.398，P<0.05)。兩側(cè)大腦LPL酶活性的差值與神經(jīng)功能缺損評分呈正相關(guān)(r=0.

11、609，P<0.01)。 結(jié)論： 1．正常情況下，大腦LPL蛋白主要分布于大腦皮層、海馬，其次為紋狀體。神經(jīng)細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮均有LPL蛋白的表達。 2．腦缺血后病灶側(cè)大腦LPL蛋白表達增多，主要位于梗死病灶的皮層周邊區(qū)，隨缺血時間的延長呈上升趨勢。缺血再灌注后病灶側(cè)大腦LPL蛋白表達增多3．腦缺血后病灶側(cè)LPL酶活性升高，隨缺血時間的延長呈上升趨勢。缺血再灌注后病灶側(cè)LPL酶活性也升高。 4．腦缺血早期