白藜蘆醇對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)細(xì)胞衰老的保護(hù)機(jī)制研究.pdf

1、目的：本研究旨在從細(xì)胞水平研究白藜蘆醇(Resveratrol, Res)對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)的WI-38衰老細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制，探討MRG家族基因在Res抗衰老中的重要作用，為今后Res作為延緩衰老治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：(1)MEM（Minimum Essential Medium）培養(yǎng)人胚肺成纖維細(xì)胞(WI-38),PDL(population doubling level)27代進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。(2)建立衰老模型：D-半

2、乳糖8g/l、16g/l、32g/l、64g/l分別對(duì)WI-38細(xì)胞干預(yù)24h、48h、72h、96h、120h, MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力，繪制生長(zhǎng)曲線。SA-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色法檢測(cè)細(xì)胞衰老程度。(3)研究分組：WI-38(PDL=27)細(xì)胞為對(duì)照組、16g/l的D-半乳糖誘導(dǎo)細(xì)胞衰老組，兩種Res處理方式：衰老前Res預(yù)處理組、衰老后Res保護(hù)組。Res干預(yù)濃度為25μM、50μM、100μM、200μM、40

3、0μM，預(yù)處理干預(yù)時(shí)間2h,衰老后Res干預(yù)時(shí)間24h。MTT法檢測(cè)各干預(yù)組細(xì)胞增殖活力及SA-β-Gal染色法檢測(cè)細(xì)胞衰老程度，檢測(cè)各組總SOD活性。用RT-PCR檢測(cè)MORF4、MRG15、MRGX、PAM14的表達(dá)。SPSS16.0進(jìn)行數(shù)據(jù)錄入及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，ImageJ灰度值分析。
　　 結(jié)果：WI-38細(xì)胞生長(zhǎng)良好，對(duì)照組衰老染色可見藍(lán)染細(xì)胞比例小于10％。D半乳糖8gll、16g/l、32g/l、64g/l、128g/

4、l處理年輕WI-38細(xì)胞48h后，與對(duì)照相比各組細(xì)胞存活率呈現(xiàn)不同程度下降(P＜0.05)。SA-β-Gal染色不同時(shí)間下D-半乳糖8g/l、16g/l、32g/l處理后細(xì)胞染色率均高于對(duì)照組（P＜0.05）。100μM Res濃度下衰老細(xì)胞存活率最高，兩種Res處理方式間無差別（P＞0.05）。衰老后25μM、50μM Res保護(hù)組細(xì)胞存活率均高于同濃度衰老前預(yù)處理組(P＜0.05)。25μM、50μM、100μM、200μMRes保

5、護(hù)組染色率比衰老組分別降低了25.12％、33.02％、39.45％、32.31％，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。100μM濃度的Res作用于衰老組細(xì)胞后，其總SOD活性不僅高于衰老組，而且也高于對(duì)照組（P＜0.01）。衰老后Res各保護(hù)組總SOD活力均高于衰老組（P＜0.01）。100μMRes能明顯上調(diào)MORF4、MRG15基因的表達(dá)(P＜0.05),400μM Res可下調(diào)MORF4、MRG15基因的表達(dá)(P＜0.05)。<

6、br>　　 結(jié)論：1. D-半乳糖可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的WI-38細(xì)胞發(fā)生衰老改變，包括SA-p-Gal染色陽性率上升，細(xì)胞增殖能力降低。2.100μM Res濃度對(duì)衰老WI-38細(xì)胞保護(hù)作用最強(qiáng)，衰老后Res處理24h方式保護(hù)能力大于衰老前Res預(yù)處理2h方式。100μM Res濃度提高衰老WI-38細(xì)胞總SOD活性能力最強(qiáng)。3.100μM Res能明顯上調(diào)衰老細(xì)胞MORF4、MRG15基因的表達(dá)，而400μMRes處理衰老細(xì)胞后，MOR