柴胡疏肝散對(duì)卒中后抑郁大鼠海馬神經(jīng)元凋亡細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、卒中后抑郁癥(post-strock depression,PSD)是一種常見(jiàn)的卒中后并發(fā)癥?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)PSD發(fā)生的機(jī)理仍處在探索階段,其臨床療效仍不理想且副作用明顯。中醫(yī)藥針對(duì)PSD辨證論治,既能治療中風(fēng),也能顯著改善中風(fēng)后抑郁狀態(tài),具有較大的優(yōu)勢(shì)。目前有關(guān)卒中后神經(jīng)元凋亡相關(guān)基因的表達(dá)研究越來(lái)越多且漸趨深入,隨著對(duì)凋亡基因研究的深入及對(duì)凋亡機(jī)制的闡明,用干預(yù)基因表達(dá)的方法治療PSD是可以預(yù)見(jiàn)的具有潛力和突破性的手段。中醫(yī)對(duì)PSD臨床

2、辨證分型也多以肝郁氣滯為主,從調(diào)肝的角度治療PSD具有一定的理論基礎(chǔ)。柴胡疏肝散是疏肝解郁的經(jīng)典方,對(duì)PSD的治療作用也得到了臨床公認(rèn)。對(duì)卒中和抑郁癥兩種病證實(shí)驗(yàn)研究表明,其大鼠海馬神經(jīng)元均有凋亡存在。PSD的病機(jī)遠(yuǎn)比單純的卒中和抑郁癥復(fù)雜,PSD大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)鮮有報(bào)道,柴胡疏肝散對(duì)PSD的病情改善情況,還需要在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步驗(yàn)證。
　　目的:觀察PSD模型大鼠海馬神經(jīng)元凋亡相關(guān)基因表達(dá)的變化及柴胡疏肝散干預(yù)作

3、用,并通過(guò)柴胡疏肝散的治療作用,從細(xì)胞分子水平上探索PSD發(fā)生的機(jī)理及柴胡疏肝散治療機(jī)制。
　　方法:健康雄性SD大鼠100只,隨機(jī)分為3組,即柴胡疏肝散治療組、PSD模型組和正常組。除正常組外,其余2組首先線栓法制備局灶性腦缺血大鼠模型,并按longa評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分,手術(shù)一周后開(kāi)始復(fù)合制備PSD大鼠模型,同時(shí)柴胡疏肝散治療組灌胃給藥21天,PSD模型組蒸餾水灌胃。造模期間給予稱重及OFT行為學(xué)評(píng)定。各實(shí)驗(yàn)組多聚甲醛溶液固定后取

4、大鼠海馬組織石蠟切片,HE染色,鏡下觀察海馬組織病理形態(tài)及凋亡特征變化;免疫組化法檢測(cè)大鼠海馬組織Bcl-2、Bax及caspase-3等凋亡蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:①除正常對(duì)照組外,實(shí)驗(yàn)大鼠經(jīng)過(guò)神經(jīng)缺損評(píng)分、體重變化、OFT行為學(xué)測(cè)試等方法檢驗(yàn),大多數(shù)大鼠均出現(xiàn)了病灶對(duì)側(cè)肢體不同程度功能障礙,術(shù)后1周肢體功能有所恢復(fù),復(fù)合造模3周后PSD模型組大鼠多數(shù)出現(xiàn)精神萎靡,四肢活動(dòng)減少,興趣缺乏,體重減輕,OFT行為學(xué)分值降低,提示P

5、SD大鼠模型比較成功。②光鏡觀察:正常組可見(jiàn)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元排列較規(guī)則、緊密,細(xì)胞界限清楚,細(xì)胞帶較完整,細(xì)胞核較大,核仁清晰;PSD模型組海馬CA1區(qū)細(xì)胞排列紊亂,神經(jīng)細(xì)胞脫失嚴(yán)重,細(xì)胞帶看不清,胞核固縮明顯;柴胡疏肝散治療組海馬CA1區(qū)細(xì)胞排列不很緊密,部分胞核輕度固縮,顯示柴胡疏肝散治療組海馬神經(jīng)元損傷程度較PSD模型組有明顯減輕;③免疫組化分析:各組均出現(xiàn)了免疫陽(yáng)性染色,但染色程度有明顯差別。正常對(duì)照組海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞胞漿

6、染色很淺,柴胡疏肝散治療組染色較深,PSD模型組海馬CAl區(qū)染色程度最重。與正常對(duì)照組比較,PSD模型組、柴胡疏肝散治療組的Bax、caspase-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)有所升高,Bcl-2蛋白表達(dá)有所下降(P<0.01);柴胡疏肝散治療組與PSD模型組相比,則明顯下調(diào)Bax、caspase-3蛋白表達(dá)(P<0.01),上調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)(P<0.01)。
　　結(jié)論:1、PSD模型大鼠海馬神經(jīng)元存在細(xì)胞凋亡現(xiàn)象的發(fā)生;2、PSD模型大