肝臟非實(shí)質(zhì)細(xì)胞照射對殘存肝腫瘤細(xì)胞及肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞放射敏感性的影響.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文肝臟非實(shí)質(zhì)細(xì)胞照射對殘存肝腫瘤細(xì)胞及肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞放射敏感性的影響姓名：周樂源申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：曾昭沖20120410復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文檢測到與轉(zhuǎn)移相關(guān)的多個因子照射組培養(yǎng)上清液較未照射組上清液增高。結(jié)論輻射誘導(dǎo)增強(qiáng)了肝癌殘存后代腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲能力的提高，并且輻射刺激肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞釋放的物質(zhì)促使癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力進(jìn)一步增強(qiáng)。照射后與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的細(xì)胞因子增高可能是促進(jìn)侵襲轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)的重要因素。關(guān)

2、鍵詞：肝腫瘤；轉(zhuǎn)移；非實(shí)質(zhì)細(xì)胞：輻射；細(xì)胞因子第三部分肝臟非實(shí)質(zhì)細(xì)胞放療后上清液增高肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞放射敏感性及其機(jī)制研究目的：肝細(xì)胞在體外培養(yǎng)對輻射耐受，而肝臟是輻射敏感器官。本研究觀察肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)后經(jīng)照射的培養(yǎng)上清液是否影響肝細(xì)胞的放射敏感性，并對其機(jī)制作進(jìn)一步探索。方法：1集落形成法檢測SR及SnonR對BRL3A放射敏感性的影響：SR及SnonR分別加入大鼠肝細(xì)胞系BRL3A，BRL3A細(xì)胞隨后也經(jīng)X線一次性照射10Gy(BI

3、也／SR組、BRL／Snor瓜組)，后采用AnnexinVPI雙染流式細(xì)胞儀及JC1法檢測細(xì)胞凋亡情況。2采用SiRNA技術(shù)沉默BRL3A細(xì)胞的促凋亡蛋白Bid，細(xì)胞分為二組，沉默組(Si組)及陰性對照(NC組)。后續(xù)實(shí)驗(yàn)分為四組：(1)NC／SR組：(2)NC／SnonR組：(3)Si／SR組；(4)Si／SnonR組。四組細(xì)胞照射10Gy后12小時分別進(jìn)行細(xì)胞核熒光染色檢測各組細(xì)胞凋亡情況。3免疫印跡法檢測上述四組細(xì)胞照射10Gy后

4、6小時，12小時，24小時凋亡相關(guān)蛋白tBid，caspase9和caspase3的表達(dá)情況。結(jié)果：1克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示在照射6，8，10Gy時，BRL／SnonR組集落形成數(shù)高于BRL／SR組，分別為017040122YS008540112；010340006VSO059士0007：005164O005w002740006，(P001)。而在1，2，4Gy時，集落形成數(shù)無差異。BRL／SR組、BRL／SnonR組照射24小時后采用流式細(xì)

5、胞檢測顯示，加SR組正常細(xì)胞數(shù)較SnonR組明顯減少(056140091VSO74340078，P=002)：JC1法顯示SR組凋亡細(xì)胞數(shù)比例較SnonR明顯高(0554士O108凇038840082，P0025)。2SiRNA法明顯降低了BRL3A細(xì)胞Bid蛋白的表達(dá)。NC組／SR、NC組／SnonR、Si組／SR、Si組／SnonR細(xì)胞核熒光染色檢測細(xì)胞壞死凋亡比例分別為016440015，011340033，005840014，O