肝非實質(zhì)細胞在肝再生中的作用機制研究.pdf

1、目的:肝再生是一個多細胞和多因子參與調(diào)控的復(fù)雜過程，肝再生的機制尚未完全闡明；已有研究提示枯否細胞(KC)和肝星形細胞(HSC)等肝非實質(zhì)細胞在肝再生過程中可能發(fā)揮關(guān)鍵性的調(diào)控作用。在整體動物水平，KC對肝再生的作用存在爭議；HSC在肝再生過程中作用較復(fù)雜，既能分泌細胞外基質(zhì)(ECM)參與再生肝結(jié)構(gòu)的重塑，又能分泌與肝細胞增殖相關(guān)的肝細胞生長因子；TGF-β<,1>作為抑制肝細胞增殖因子，在肝再生的終止階段發(fā)揮重要作用。本文擬通過探討K

2、C、HSC及其分泌的多種細胞因子在肝再生過程中的作用機制，闡明“非實質(zhì)細胞-細胞因子-肝實質(zhì)細胞”之間信號途徑在肝再生調(diào)控中的意義。 材料和方法:觀察應(yīng)用肝再生增強因子(ALR)和氯化釓(GdCl<,3>)滅活KC對小鼠肝再生速率的影響；用MTT檢測KC條件培養(yǎng)液(KCCM)，HGF和TGF-β<,1>對大鼠原代肝細胞增殖的作用；用免疫細胞化學(xué)檢測ALR對KC和HSC(IG12細胞)中IL-6和TGF-α表達的影響以及肝再生大鼠

3、的血清對IG12細胞α-SMA，TGF-β<,1>表達的影響；免疫組化，ELISA，Western blot檢測再生肝組織中PCNA，TNF-α，TGF-α，TGF-β<,1>，bcl-2，p53的表達特點；流式細胞術(shù)、Hoechst染色方法檢測TGF-β<,1>對肝部分切除(PH)后肝細胞凋亡率的影響。 實驗結(jié)果: (1)ALR在整體水平能提高PH后小鼠肝再生率，但體外細胞實驗發(fā)現(xiàn)ALR不能直接促進肝細胞的增殖。

4、 (2)ALR能提高KC和IG12表達IL-6和TGF-α。 (3)HGF，KCCM能在細胞水平促進肝細胞增殖，而TGF-β<,1>則抑制肝細胞增殖。 (4)當動物(小鼠)體內(nèi)肝KC滅活伴PH后，肝再生率高于單純切除組，KC滅活后肝組織TNF-α，TGF-α的表達增加而TGF-β<,1>的表達下降。 (5)PH后收集的大鼠血清能刺激IG12細胞提高α-SMA和TGF-β<,1>的表達。 (6)正常大鼠分

5、離的原代肝細胞和：PH后7d分離的肝細胞經(jīng)TGF-β<,1>作用后凋亡率高于未處理組(P<0.05)，而PH后1d，3d，5d的肝細胞經(jīng)過TGF-β<,1>作用后凋亡率和未處理組相比無差別。(7)經(jīng)TGF-β<,1>作用后肝細胞bcl-2(抗凋亡因子)的表達明顯下降。 結(jié)論: (1)ALR只有通過作用于KC和HSC等肝非實質(zhì)細胞發(fā)揮促進肝再生的作用，而不能直接促進肝細胞增殖。 (2)在肝再生過程中，KC和HSC等