MicroRNA-210對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放射敏感性的影響.pdf

1、第一部分、構(gòu)建放射抗拒鼻咽癌細(xì)胞系
　　目的：建立鼻咽癌放射抗拒細(xì)胞系CNE-2R，檢測(cè)其與原細(xì)胞系(CNE-2)表達(dá)差異的miRNAs,為進(jìn)一步研究miRNAs與鼻咽癌放療敏感性的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。
　　方法：用劑量梯度法建立鼻咽癌放射抗拒細(xì)胞系CNE-2R。然后，應(yīng)用細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)分析誘導(dǎo)的放射抗拒細(xì)胞系與原細(xì)胞系存在放射敏感性差異。最后，用microRNA基因芯片檢測(cè)CNE-2和CNE-2R細(xì)胞表

2、達(dá)差異的miRNAs。
　　結(jié)果：與原親代細(xì)胞CNE-2相比，放射抗拒細(xì)胞CNE-2R阻滯于G2/M期的比例明顯減少(P<0.05)。經(jīng)過(guò)0、4、8和12Gy的照射后，CNE-2細(xì)胞的存活率較CNE-2R細(xì)胞降低(P<0.05)。經(jīng)過(guò)0、4、8和12Gy劑量照射后，CNE-2R細(xì)胞的放射敏感性較CNE-2細(xì)胞降低。microRNA基因芯片顯示誘導(dǎo)成功的CNE-2R與CNE-2細(xì)胞比較，有92個(gè)表達(dá)差異>2倍的miRNAs,并用RT

3、-PCR驗(yàn)證miR-210的相對(duì)表達(dá)量(P<0.05)。
　　結(jié)論:CNE-2細(xì)胞與放射抵抗的CNE-2R細(xì)胞的miRNAs表達(dá)存在差異，其中miRNA-210的表達(dá)差異倍數(shù)最大。
　　第二部分、MicroRNA-210負(fù)性調(diào)節(jié)鼻咽癌細(xì)胞放射敏感性
　　目的：研究miR-210對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的放射敏感性的影響,為治療鼻咽癌放射抵抗提供新的靶點(diǎn)。
　　方法：用LV-hsa-miR-210慢病毒感染CNE-2細(xì)胞，用L

4、V-hsa-miR-210-inhibition慢病毒感染CNE-2R細(xì)胞，RT-PCR檢測(cè)miR-210在CNE-2-miR-210和CNE-2R-miR-210-inhibition細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量。用細(xì)胞周期和凋亡實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CNE-2,CNE-2R,CNE-2-miR-210和CNE-2R-miR-210-inhibition細(xì)胞的周期、凋亡、存活率和放射敏感性的差異。
　　結(jié)果：CNE-2和CN

5、E-2R-miR-210-inhibition細(xì)胞處于G2/M期的比例明顯高于CNE-2-miR-210和CNE-2R細(xì)胞(P<0.05)，而它們處于S期的比例明顯低于CNE-2-miR-210和CNE-2R細(xì)胞(P<0.05)。經(jīng)過(guò)4Gy的照射后，CNE-2和CNE-2R-miR-210-inhibition細(xì)胞的凋亡率較CNE-2-miR-210和CNE-2R細(xì)胞高(P<0.05)。經(jīng)過(guò)4、8和12Gy的照射后，CNE-2和CNE-