糖克煎劑防治早期糖尿病腎病實(shí)驗(yàn)與臨床研究.pdf

1、目的：通過觀察中藥復(fù)方制劑-糖克煎劑對(duì)鏈脲佐菌素（STZ）所致大鼠糖尿病腎病（DN）的尿蛋白排泄（UAE）變化、腎組織轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-β）表達(dá)的影響等以及臨床試驗(yàn)的結(jié)果，以探討糖克煎劑防治早期糖尿病腎病的效果及其作用機(jī)制。
　　 材料與方法：
　　 1．實(shí)驗(yàn)研究
　　 1.1造模方法采用高糖高脂飼料喂養(yǎng)結(jié)合腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）的造模方法復(fù)制出糖尿病模型，該方法采用高糖高脂喂養(yǎng)Wistar大鼠一個(gè)月，

2、誘發(fā)動(dòng)物肥胖，引起胰島素抵抗，再以STZ（40mg/kg）腹腔注射造成胰島素抵抗，從而引發(fā)高血糖，并出現(xiàn)微量白蛋白尿。
　　 1.2分組和給藥方法本實(shí)驗(yàn)先按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組10例和實(shí)驗(yàn)組70例，將實(shí)驗(yàn)組造模后一周內(nèi)血糖值穩(wěn)定在16．7mmol/L的61只大鼠再按血糖值隨機(jī)分為模型組12只、中藥預(yù)防組12只、低劑量組12只、高劑量組13只和西藥對(duì)照組12只。中藥預(yù)防組在注射STZ成DM模后立即開始灌服糖克煎劑，每日上午8～9

3、時(shí)1次；其余各組均在成DM模4周后灌胃給藥。模型組和正常對(duì)照組予等量生理鹽水，西藥對(duì)照組予洛汀新1mg/kg·d灌胃給藥，中藥預(yù)防組共給藥12周，中藥低、高劑量組及西藥對(duì)照組給藥8周。實(shí)驗(yàn)期間自由飲水。中藥預(yù)防組和低劑量組劑量按成人用量的6.3倍給藥，高劑量組按低劑量組3倍灌胃給藥。
　　 1.3觀察指標(biāo)與測定方法主要觀察糖克煎劑的藥效學(xué)指標(biāo)，包括觀察糖克煎劑對(duì)DN大鼠一般情況的影響，糖克煎劑對(duì)DN大鼠體重、腎重、相對(duì)腎重的影響

4、，采用日本愛科來公司GT-1810血糖儀測定血糖，每周一次；用酶法測定血脂，實(shí)驗(yàn)后檢測一次；用離子交換層析法測定糖化血紅蛋白（GHb），實(shí)驗(yàn)后檢測一次。用lmmulite法檢測24h尿蛋白定量及尿微量白蛋白排泄率（UAER），實(shí)驗(yàn)后一次。用HE染色和Masson染色腎組織切片，進(jìn)行普通光鏡觀察、用醋酸鈾-檸檬酸鉛雙重染色進(jìn)行電鏡觀察各組實(shí)驗(yàn)性DN大鼠腎組織病理形態(tài)學(xué)變化；采用免疫組化法測定轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-β1）及其內(nèi)部傳導(dǎo)分子sm

5、ad4的蛋白表達(dá)情況，同時(shí)檢測了腎組織谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）以及超氧化物歧化酶（SOD）兩種抗氧化酶的活性等。通過以上效應(yīng)指標(biāo)的檢測，進(jìn)一步分析探討了糖克煎劑對(duì)DN大鼠的療效及其作用機(jī)制。
　　 2．臨床研究選擇氣虛血瘀型早期DN患者90例，采用隨機(jī)對(duì)照的方法，治療組（45例）用糖克煎劑（黃芪30g、黃精30g、山藥20g、茯苓20g、澤蘭30g、坤草20g、牛蒡子30g），陽性藥對(duì)照組（45例）用洛汀新（北京諾華制

6、藥有限公司提供，10mg/d），療程8周，從尿蛋白排泄率（UAER）、血糖（FPG）、糖化血紅蛋白（GHb）、血脂、血流變、以及癥狀積分等多項(xiàng)指標(biāo)，對(duì)氣虛血瘀型早期糖尿病腎病進(jìn)行了較為全面的臨床觀察。
　　 3．統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間差異采用方差分析、t檢驗(yàn)。計(jì)量資料以x±s表示，以P<0．05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1．動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 1.1對(duì)大鼠一般

7、情況的影響：正常對(duì)照組大鼠體重明顯增加，精神狀態(tài)良好，反應(yīng)靈敏，動(dòng)作敏捷，毛色光澤。實(shí)驗(yàn)組大鼠均表現(xiàn)為多飲、多食、多尿，精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，動(dòng)作緩慢，毛發(fā)欠澤。體重、飲水量、尿量等變化圖表顯示，中藥預(yù)防組、低劑量組和高劑量組大鼠體重從第五周開始上升，12周時(shí)明顯回升，飲水量第8周即接近正常，尿量12周末與正常組無差異，預(yù)防組效果明顯，與模型組比較P<0.01。提示糖克煎劑有改善DN大鼠“三多一少”癥狀和預(yù)防DN病情發(fā)生發(fā)展的作用。

8、>　　 1.2對(duì)大鼠24h尿蛋白排泄率的影響：觀察組24h尿蛋白排泄率指標(biāo)，比模型組都有降低，且中藥糖克煎劑預(yù)防組和高劑量組效果顯著。
　　 1.3對(duì)大鼠血糖的影響：各實(shí)驗(yàn)組血糖明顯高于正常對(duì)照組，中藥組與模型組比較有顯著性差異。中藥組糖化血紅蛋白，比模型組都有降低，預(yù)防組效果顯著。
　　 1.4對(duì)大鼠血脂的影響：防治組總膽固醇、甘油三脂含量均低于模型組，其降低膽固醇作用，與模型組比較有顯著性差異。
　　 1.

9、5．對(duì)大鼠腎重、相對(duì)腎重的影響：與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠腎重及KW/BW均有所增加。糖克煎劑和洛汀新治療8周后，對(duì)上述指標(biāo)均有降低作用，且中藥組作用明顯。
　　 1.6對(duì)大鼠腎臟病理變化的影響
　　 1.6.1肉眼及光鏡下觀察：模型組多數(shù)大鼠腎臟體積增大，其中1例腎臟表面可見3個(gè)2×3mm大小的結(jié)節(jié)。光鏡下腎小球腫脹、充血，體積明顯增大，腎小囊變窄，部分腎小球GBM增厚，腎小球系膜增寬，系膜細(xì)胞增生。近曲小管上皮腫脹

10、，有的小管腔內(nèi)可見透明管型，遠(yuǎn)曲小管上皮胞漿空寬，顯示氣球樣變性。部分腎小管出現(xiàn)管腔變窄，腎間質(zhì)部分出現(xiàn)水腫，少數(shù)可見纖維化。中藥預(yù)防組、低劑量組、高劑量組和西藥組，腎臟體積大部分較模型組變小，但仍較正常大鼠腎臟有所增大；光鏡下見腎小球輕度增大、充血，GBM輕度增厚，系膜輕度增寬，腎小管細(xì)胞腫脹等病變，病變范圍與模型組比較小且輕，未見腎小球硬化及腎間質(zhì)纖維化。治療組間未見明顯差異。
　　 1.6.2電鏡下觀察：模型組大鼠腎臟GB

11、M呈勻質(zhì)性增厚，足細(xì)胞胞突多呈連續(xù)性附著于基膜上，形成足突融合，足細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器減少，系膜區(qū)擴(kuò)大，系膜基質(zhì)增多，胞質(zhì)內(nèi)線粒體腫脹，基質(zhì)密度下降，有的嵴減少，溶酶體數(shù)量增多，并且體積較大；腎小管基底膜節(jié)段性變薄或增厚；有的腎小管上皮細(xì)胞脫落、微絨毛減少、變短、甚至脫落，毛細(xì)血管內(nèi)可見紅細(xì)胞聚集，出現(xiàn)空泡變性。各治療組電鏡下可見腎小球GBM和腎小管基底膜增厚較模型組大鼠輕，上皮細(xì)胞足突距離增寬，腎小管上皮細(xì)胞及微絨毛輕微脫落。治療組間無顯著差

12、異性。
　　 1.7對(duì)大鼠腎臟組織TGF-β1及smad4的影響
　　 正常組大鼠腎臟在腎小球和腎小管上皮細(xì)胞中均有TGF-β1蛋白表達(dá)，但量較少，著色較淺。與正常組大鼠相比，模型組在上述部位的TGF-β1蛋白表達(dá)量明顯增加，呈極強(qiáng)陽性表達(dá)，著色極深，說明TGF-β1蛋白表達(dá)增強(qiáng)。各治療組TGF-β1在上述部位也有弱陽性表達(dá)，但與模型組相比有所下降，說明經(jīng)糖克煎劑和洛汀新治療后可以減少DN大鼠TGF-β1蛋白的表達(dá)。sm

13、ad4檢測結(jié)果與TGF-β1類似。
　　 1.8．對(duì)大鼠腎臟組織GSH-Px、SOD的影響
　　 腎組織GSH-Px和SOD活力，模型組明顯低于正常對(duì)照組，預(yù)防組、低劑量組、高劑量組及西藥組均高于模型組，預(yù)防組與西藥組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明中藥糖克煎劑能夠提高DN大鼠的腎組織GSH-Px和SOD活力，且作用優(yōu)于洛汀新。
　　 2．臨床觀察結(jié)果主要檢測指標(biāo)24h尿微量白蛋白排泄率（UAER），治療組由治療前的74．

14、36±47．90μg/min降至13．25±1.26μ g/min，前后對(duì)比有顯著性差異，與對(duì)照組比較P<0．05；空腹血糖、糖化血紅蛋白（GHb）、血脂、血流變指標(biāo)，治療組均較治療前有明顯變化；證候積分由治療前的19．58±2.55降至治療后的4．42±1.65，前后比較有顯著性差異；證明糖克煎劑在改善氣虛血瘀型早期DN的癥狀和減少客觀指標(biāo)方面均有明顯效果。臨床療效統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，糖克煎劑治療早期DN的愈顯率為44．44％，總有效率為9

15、5．56％，均優(yōu)于西藥洛汀新對(duì)照組。
　　 結(jié)論：
　　 1．糖克煎劑對(duì)氣虛血瘀型早期DN患者有明顯的治療效果。
　　 2．糖克煎劑可改善DN大鼠的一般狀況，減輕“三多一少”的癥狀。
　　 3．糖克煎劑能明顯降低早期DN的24h尿微量白蛋白排泄率，故而能減輕尿蛋白對(duì)腎臟的損害，對(duì)腎臟起到了很好的保護(hù)作用。
　　 4．糖克煎劑能降低血糖，調(diào)節(jié)血脂代謝紊亂，改善血流變，進(jìn)而改善腎臟微循環(huán)，提升機(jī)體的抗

16、氧化能力及保護(hù)血管內(nèi)皮功能。
　　 5．糖克煎劑能夠控制腎臟肥大，保護(hù)腎小球和腎小管結(jié)構(gòu)，改善腎功能。
　　 6．糖克煎劑抑制DN大鼠腎臟TGF-β1/smad4蛋白表達(dá)，從而抑制腎小球系膜細(xì)胞ECM的合成，減少ECM的異常積聚，進(jìn)而改善腎小球硬化程度。
　　 7．糖克煎劑增加DN大鼠腎組織GSH-Px以及SOD活力，防止自由基對(duì)腎臟組織細(xì)胞的損傷，保護(hù)腎臟功能。
　　 8．糖克煎劑早期足量用藥可以改善早