玄芪平消湯防治早期糖尿病腎病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：糖尿病腎?。―N）是糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥之一，DN發(fā)病可能與高血壓、高血糖、高血脂、血流動(dòng)力學(xué)障礙等因素有關(guān)。DN的主要病理特點(diǎn)是系膜區(qū)系膜細(xì)胞增生、大量基質(zhì)堆積，系膜區(qū)變寬或結(jié)節(jié)形成以及腎小管、腎小球基底膜增厚，繼而發(fā)展為腎小球硬化，最后發(fā)展為腎功能衰竭。
　　 目前認(rèn)為腎小球基質(zhì)堆積和基底膜增厚的原因主要是由于細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）代謝紊亂，其合成增加和（或）降解減少所致。Matrix metalloproTein

2、ase-2（MMP-2）是ECM的主要降解酶。MMP-2的表達(dá)關(guān)系到DN腎臟的病理改變進(jìn)程，通過調(diào)節(jié)腎小球MMP-2的蛋白表達(dá)可減輕腎小球細(xì)胞外基質(zhì)沉積，保護(hù)糖尿病大鼠的腎功能和形態(tài)，減緩DN腎小球纖維化的進(jìn)程，因此可通過調(diào)整腎組織MMP-2的表達(dá)和活性變化防治早期DN。腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）的異常激活在DN的發(fā)病機(jī)制中具有重要作用，阻斷該系統(tǒng)對(duì)DN具有保護(hù)作用，抑制血管緊張素Ⅱ的產(chǎn)生并阻斷其作用是治療DN重要措施之一。

3、　　 糖尿病屬于中醫(yī)學(xué)消渴病范疇，病機(jī)特點(diǎn)為燥熱陰虛，病程日久，陰津耗傷不止，同時(shí)耗氣，進(jìn)而導(dǎo)致氣陰兩虛。中醫(yī)雖無DN之名，但從癥狀來看，當(dāng)屬其變證之一。早期DN的病機(jī)特點(diǎn)是以氣陰兩虛為主?！蹲C治準(zhǔn)繩》云：“渴而便數(shù)有膏為下消（經(jīng)謂腎消）”，可以將DN納入下消范疇，而腎陰虧虛是下消的主要病機(jī)。玄芪平消湯功能益氣養(yǎng)陰、清熱活血，標(biāo)本兼治。本方已應(yīng)用多年，療效甚佳，可見應(yīng)用玄芪平消湯防治早期。DN是有一定理論和臨床實(shí)踐基礎(chǔ)的。本實(shí)驗(yàn)采用腹

4、腔注射鏈脲佐菌素（STZ）的方法復(fù)制DN大鼠模型，觀察玄芪平消湯對(duì)血糖、血脂、腎功能、24小時(shí)尿白蛋白排泄率、腎臟病理形態(tài)學(xué)、腎重/體重的值、血漿及腎組織中血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）含量、以及腎組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）表達(dá)的改變。初步探討本方防治早期DN的作用機(jī)理，為益氣養(yǎng)陰、清熱活血法防治早期DN提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：選用健康SD大鼠（雄性，體重180±20g）42只，普通飼料喂養(yǎng)1周，檢測(cè)血糖、尿糖均

5、為陰性，按體重隨機(jī)分為正常組（6只）、模型組（12只）、玄芪平消湯組（12只）、苯那普利組（12只），除正常組外，其他三組均采取腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）復(fù)制糖尿病模型，造模72小時(shí)后測(cè)血糖超過16.7mmol/L，即確定為糖尿病模型大鼠。正常組注射相當(dāng)體積的檸檬酸緩沖液。造模第三天，模型組、苯那普利組、玄芪平消湯組，分別給予自來水、苯那普利4.3mg/kg、玄芪平消湯灌胃36g/kg，每日一次。正常組也給予相同體積的自來水灌胃。實(shí)驗(yàn)

6、期間，各組動(dòng)物自由進(jìn)食、飲水。于第8周用代謝籠收集24小時(shí)尿液，用放射免疫法測(cè)定尿微量白蛋白，計(jì)算尿白蛋白排泄率（urinary albumin excretion rate，UAER），并測(cè)尿肌酐（urinary creatinine，Ucr）。于第8周末，禁食8小時(shí)，稱重，全部動(dòng)物被處死股動(dòng)脈取血，分離血清，用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組大鼠血糖（PG）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr），計(jì)算內(nèi)生肌

7、酐清除率（Ccr）。無菌操作取雙腎，剝離被膜后雙腎稱重，計(jì)算腎臟肥大指數(shù)（kidney weight/body weig-ht，KW/BW），左腎固定后石蠟包埋，切成4μm厚的切片行HE和PAS染色。光鏡下觀察腎臟病理形態(tài)學(xué)變化。右腎于矢狀面縱向切開后，取部分右腎組織勻漿后離心，取上清備測(cè)腎組織AngⅡ含量。右腎余組織置4％甲醛初步固定，常規(guī)固定，石蠟包埋切片備用，待用免疫組化法檢測(cè)MMP-2在腎組織的表達(dá)情況，并用病理圖像分析軟件進(jìn)行

8、半定量分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，所有數(shù)據(jù)均用x±s表示，采用單因素方差分析法，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件完成。
　　 結(jié)果：
　　 （1）一般情況及血糖：造模后糖尿病各組大鼠體重增長(zhǎng)緩慢，毛色差，血糖增高，與正常組比較有顯著性差異（P<0.01），玄芪平消湯組有一定的降糖作用，與模型組比較有顯著性差異（P<0.01），苯那普利組無明顯降糖效果，與模型組比較無顯著性差異（P>0.05）。
　　 （2）血脂：第8周

9、末，除正常組外，其余各組未出現(xiàn)血脂明顯增高，與正常組比較均無顯著性差異（P>0.05），玄芪平消湯組不能降低TG和TC的水平，與模型組比較無顯著性差異（P>0.05），苯那普利組降脂效果亦不明顯，與模型組比較無顯著性差異（P>0.05），兩組間比較無顯著性差異（P>0.05）。
　　 （3）腎功能：模型組BUN、Scr、Ccr與正常組比較無顯著性差異（P>0.05），苯那普利組和玄芪平消湯組均不能降低BUN、Scr、Ccr的水平

10、，與模型組比較無顯著性差異（P>0.05），兩組間比較無顯著性差異（P>0.05）。
　　 （4）24h尿白蛋白排泄率：第8周末，模型組24h尿白蛋白排泄率明顯高于正常組（P<0.01），玄芪平消湯組和苯那普利組均能降低24h尿白蛋白排泄率，與模型組比較有顯著性差異（P<0.01），但兩組比較無顯著性差異（P>0.05）。
　　 （5）腎重/體重的比值：模型組腎重/體重的比值明顯高于正常組（P<0.01），玄芪平消湯組與

11、苯那普利組腎重/體重的比值明顯低于模型組，與模型組比較有顯著性差異（P<0.01），兩者之間無顯著性差異（P>0.05）。
　　 （6）血漿及腎組織中AngⅡ含量：模型組中血漿及腎組織中AngⅡ含量均高于正常組（P<0.01）。苯那普利組血漿及腎組織中AngⅡ含量明顯低于模型組（P<0.01），玄芪平消湯組腎組織中AngⅡ含量明顯低于模型組（P<0.01）而血漿中AngⅡ含量低于模型組（P<0.05），兩者之間無顯著性差異（P>

12、0.05）。
　　 （7）腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察：模型組光鏡下可見腎小球體積增大，球囊增大呈分葉狀，腎小球毛細(xì)血管基底膜增厚，系膜細(xì)胞增生，系膜區(qū)增寬，系膜基質(zhì)PAS染色呈強(qiáng)陽性，腎小管上皮細(xì)胞腫脹變性。玄芪平消湯組及苯那普利組大鼠腎組織病變?nèi)缒I小球基底膜增厚及系膜細(xì)胞增生比模型組有明顯改善，系膜區(qū)PAS染色陽性物質(zhì)明顯減少。
　　 （8）腎組織中MMP-2免疫組化結(jié)果：糖尿病組與對(duì)照組相比，腎組織MMP-2表達(dá)明顯降低而

13、血漿及腎組織中AngⅡ含量升高（P<0.01），玄芪平消湯組和苯那普利組的表達(dá)與模型組比較明顯增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），玄芪平消湯組和苯那普利組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。半定量分析結(jié)果顯示：模型組每張切片中陽性染色面積占視野中腎小球總面積的比值明顯低于正常組（P<0.01），提示玄芪平消湯組和苯那普利組都可增加糖尿病大鼠腎小球、腎小管及腎間質(zhì)中MMP-2的表達(dá)，并且玄芪平消湯組和苯那普利組比較無明顯差異（P>0.05）