血管緊張素1-7經(jīng)Rho-Rock通路對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞收縮的影響.pdf

1、多種慢性肝病可由肝纖維化發(fā)展為肝硬化，門(mén)靜脈高壓是肝硬化的主要特征之一。肝硬化狀態(tài)下，肝內(nèi)血管阻力的增加是導(dǎo)致門(mén)靜脈高壓的重要因素。肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell，HSC）是肝細(xì)胞外基質(zhì)的主要細(xì)胞，HSC活化在肝纖維化的發(fā)生發(fā)展以及門(mén)脈高壓形成一系列過(guò)程中起關(guān)鍵作用。活化的HSC轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，不斷增殖，并獲得收縮性。當(dāng)后者發(fā)生強(qiáng)烈收縮，致使肝竇直徑縮小，肝內(nèi)血管阻力增大；同時(shí)可引起肝組織瘢痕攣縮

2、，進(jìn)一步增加肝內(nèi)血管阻力，導(dǎo)致門(mén)靜脈高壓?？梢?jiàn)，HSC收縮的調(diào)控機(jī)制是門(mén)靜脈高壓機(jī)理研究的重要一環(huán)。近年來(lái)，肝內(nèi)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（the renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS）已成為肝纖維化研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)，隨著對(duì)RAAS認(rèn)識(shí)的不斷深化，發(fā)現(xiàn)了RAAS的許多新組分，如血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2（ACE2）、血管緊張素1-7（Ang-（1-7））、Ang-（1-7）的受體Mas等。它們構(gòu)成的

3、ACE2-Ang（1-7）-Mas受體軸，成為RAAS的另一重要分支，對(duì)ACE-AngⅡ-AT1R軸具有顯著的抑制作用。肝內(nèi)ACE-AngⅡ-AT1R軸與門(mén)靜脈高壓的形成有密切關(guān)系。目前未見(jiàn)有關(guān)ACE2-Ang（1-7）-Mas受體軸對(duì)HSC收縮調(diào)控的研究報(bào)道。HSC活化后轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞，具有平滑肌細(xì)胞的特征，提示HSC收縮和平滑肌細(xì)胞收縮的分子機(jī)制是類(lèi)似的，可通過(guò)鈣離子依賴(lài)性和非鈣離子依賴(lài)性?xún)煞N通路完成收縮。在非鈣途徑中，R

4、ho-Rock通路對(duì)HSC收縮的調(diào)控機(jī)制是近年研究的熱點(diǎn)。本研究通過(guò)觀(guān)察Ang-（1-7）對(duì)HSC收縮及Rho-Rock信號(hào)通路上各元件表達(dá)的影響來(lái)闡明其對(duì)HSC收縮調(diào)控的影響。 目的:探討血管緊張素1-7（angiotensin1-7，Ang-（1-7））對(duì)大鼠HSC收縮以及由Rho激酶介導(dǎo)的非Ca2+依賴(lài)性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。 方法:①將HSC-T6細(xì)胞株給予Ang-（1-7）1μmol/L處理，聚硅酮膜法直觀(guān)檢測(cè)H

5、SC的收縮性；②將HSC-T6細(xì)胞株給予Ang-（1-7）10μmol/L處理，免疫印跡法檢測(cè)肌球蛋白輕鏈（myosin light chain，MLC）、磷酸化MLC和α平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）表達(dá)水平。觀(guān)察Ang-（1-7）、AngⅡ（angiotensinⅡ）、Ang-（1-7）MAS受體阻斷劑A779、AngⅡ和Ang-（1-7）對(duì)磷酸化MLC和α-SMA表達(dá)水平的影響；③逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)Rho-Roc

6、k通路中Rock2（Rho kinase2）、RhoAGTP、RhoGEF（Rho Guanine Nucleotide Exchange Factors，RhoGEF）的表達(dá)。 結(jié)果:AngⅡ處理組磷酸化MLC蛋白的表達(dá)顯著增強(qiáng)（P=0.000）。Ang-（1-7）可抑制AngⅡ誘導(dǎo)的HSC的收縮。AngⅡ+Ang-（1-7）處理組可抑制AngⅡ誘導(dǎo)的MLC蛋白磷酸化水平（P=0.000），而Ang-（1-7）處理組磷酸化ML

7、C蛋白水平顯著高于A(yíng)ng-（1-7）+A779處理組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。AngⅡ處理組α-SMA蛋白的表達(dá)顯著增強(qiáng)（P=0.000），AngⅡ+Ang-（1-7）處理組可抑制AngⅡ誘導(dǎo)的α-SMA蛋白表達(dá)水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。AngⅡ組RhoGEF mRNA顯著高于陰性對(duì)照組（P=0.000），Ang-（1-7）+AngⅡ組RhoGEF mRNA比AngⅡ組的表達(dá)顯著減弱（P=0.000），Ang

8、-（1-7）組RhoGEF mRNA顯著低于陰性對(duì)照組（P=0.000），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。AngⅡ組Rock2 mRNA顯著高于陰性對(duì)照組（P=0.000），Ang-（1-7）+AngⅡ組Rock2 mRNA比AngⅡ組的表達(dá)顯著減弱（P=0.000），Ang-（1-7）組Rock2 mRNA顯著低于陰性對(duì)照組（P=0.000），Ang-（1-7）+A779組Rock2 mRNA的表達(dá)顯著低于A(yíng)ng-（1-7）組，差

9、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。AngⅡ組RhoAGTP mRNA顯著高于陰性對(duì)照組（P=0.000），Ang-（1-7）+AngⅡ組RhoAGTP mRNA比AngⅡ組的表達(dá)顯著減弱（P=0.000），Ang-（1-7）組RhoAGTP mRNA顯著低于陰性對(duì)照組（P=0.000），Ang-（1-7）+A779組RhoAGTP mRNA的表達(dá)顯著低于A(yíng)ng-（1-7）組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。 結(jié)論: Ang-