鹽酸小檗堿囊泡的制備及體內(nèi)外研究.pdf

1、目的：小檗堿（berberine，BER），又稱(chēng)黃連素，在自然界多以季銨鹽的形式存在。小檗堿的鹽酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽均難溶于水，臨床上多用其鹽酸鹽。鹽酸小檗堿作為清熱、解毒、抗菌藥用于臨床，對(duì)多種革蘭氏陽(yáng)性及陰性菌、結(jié)核桿菌和真菌均有抑制和殺滅作用。但是藥動(dòng)學(xué)研究和臨床應(yīng)用效果顯示，小檗堿的吸收較差，生物利用度較低，對(duì)藥理作用的發(fā)揮有一定的影響。
　　 囊泡作為一種微粒載藥體系，具有與細(xì)胞膜極其相似的膜結(jié)構(gòu)，能夠增加藥

2、物的吸收，提高藥物的生物利用度，改變藥物在體內(nèi)的分布，降低藥物的毒副作用。因而，本課題研究小檗堿囊泡的制備工藝，并考察其在大鼠體內(nèi)的分布和藥物動(dòng)力學(xué)過(guò)程，以期為開(kāi)發(fā)新型的小檗堿制劑奠定理論基礎(chǔ)。
　　 方法：平衡溶解度測(cè)定方法考察小檗堿在不同pH值磷酸鹽緩沖液中的溶解度，測(cè)定小檗堿在正辛醇-緩沖液中的分配系數(shù)。
　　 對(duì)不同表面活性劑、表面活性劑與β-谷甾醇不同投料比、孵化時(shí)間、孵化溫度、小檗堿溶液的濃度以及pH值進(jìn)行處

3、方和制備工藝的單因素考察，去除對(duì)包封率無(wú)影響或影響較小的因素。采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)影響較大的三個(gè)因素pH值、藥物濃度、以及表面活性劑和β-谷甾醇的投料比進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，對(duì)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果作直觀分析，確定最佳處方。以光學(xué)顯微鏡觀察囊泡的形態(tài)，利用Motic Images Advanced3.2成像系統(tǒng)計(jì)算囊泡粒徑，并繪制粒徑分布圖。建立高效液相色譜法，對(duì)小檗堿囊泡的包封率進(jìn)行測(cè)定。
　　 以小檗堿混懸液為對(duì)照，考察小檗堿囊泡在人工胃液（pH

4、=3）和人工腸液（pH=6.8）中的體外釋藥特征，繪制累計(jì)釋藥百分率.時(shí)間曲線。
　　 將12只Wistar大鼠隨機(jī)分為2組，分別按30mg·kg-1劑量皮下注射小檗堿囊泡和小檗堿混懸液。于規(guī)定時(shí)間眼框取血1ml，用建立的高效液相色譜法測(cè)定血中小檗堿濃度，并用3p97藥動(dòng)學(xué)軟件進(jìn)行模型擬合，計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。另將10只大鼠隨機(jī)分為2組，同法給藥，90min后斷頭處死，立即摘取心、肝、脾、肺、腎、腦和脂肪等組織，制成25％（m/v）

5、的勻漿液，以高效液相色譜法測(cè)定組織中藥物濃度。
　　 將小檗堿囊泡于不同溫度下放置24h，測(cè)定包封率，考察溫度對(duì)小檗堿囊泡穩(wěn)定性的影響。常溫放置不同天后，測(cè)定包封率，考察小檗堿囊泡的穩(wěn)定性。
　　 結(jié)果：小檗堿在磷酸鹽緩沖液中的溶解度隨pH值的增大而增大，pH值為12時(shí)出現(xiàn)峰值1.807mg.ml-1。當(dāng)pH值為13時(shí)，小檗堿的正辛醇.緩沖液分配系數(shù)最大，為48.97。
　　 經(jīng)處方篩選確定制備小檗堿囊泡的最優(yōu)處

6、方為：司盤(pán)20與β-谷甾醇質(zhì)量比為200：15，緩沖液pH值為10，小檗堿的濃度為0.5mg.ml-1。制備的囊泡在光學(xué)顯微鏡下呈圓形，粒徑集中在300～800nm范圍內(nèi)。高效液相色譜法測(cè)其包封率為31.73％。
　　 模擬體內(nèi)環(huán)境的體外釋放研究結(jié)果顯示，在人工胃液中，小檗堿囊泡與小檗堿混懸液釋藥速度基本相同，2h累計(jì)釋放80％；在人工腸液中，小檗堿囊泡的釋藥速度明顯降低，2h累計(jì)釋放50％，說(shuō)明囊泡對(duì)小檗堿具有緩釋作用。

7、>　　 藥物動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果表明，給予小檗堿囊泡的大鼠，對(duì)小檗堿的吸收速度較快，10min就已經(jīng)在最高濃度之后，因而血藥濃度-時(shí)間曲線圖上未找到吸收相，120min左右出現(xiàn)第二個(gè)峰值，峰濃度達(dá)0.53μg.ml-1；而小檗堿混懸液組大鼠藥物濃度達(dá)到峰值則需要90min，峰濃度為0.49μg.ml-1。1440min后混懸液組小檗堿基本排泄完全，而給予囊泡組大鼠血中小檗堿濃度仍有0.05μg.ml-1。
　　 用藥動(dòng)學(xué)軟件3p97

8、進(jìn)行數(shù)據(jù)處理后發(fā)現(xiàn)，兩種小檗堿制劑在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過(guò)程均符合一室模型，并以一級(jí)速度消除。小檗堿囊泡的半衰期（t1/2ke=281.652min）比小檗堿混懸液的半衰期（t1/2ke=218.667min）長(zhǎng)。小檗堿混懸液的清除率明顯大于小檗堿囊泡的清除率，使藥物在體內(nèi)的存留時(shí)間延長(zhǎng)。AUC0→t由126.314（μg·ml-1）·min上升到186.520（μg.ml-1）·min。
　　 給藥90min后，小檗堿在腎臟內(nèi)含量最

9、高，囊泡給藥組為30.669±18.682μg·g-1，混懸液給藥組為19.387±8.105μg·g-1。其次為心和肺。小檗堿能夠透過(guò)血腦屏障，但腦中含量較低，分別為0.552±0.157μg·g-1、0.372±0.045μg·g-1。
　　 溫度影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，小檗堿囊泡在40℃以下放置24h后，包封率基本無(wú)變化，而溫度高于40℃時(shí)，包封率明顯下降。而小檗堿囊泡在常溫下放置7天后，包封率達(dá)到最大值，一個(gè)月后包封率則顯著降