楊梅抑菌成分及其分離分析.pdf

1、楊梅(MyricarubraSieb.etZucc)是我國傳統(tǒng)特產(chǎn)水果，營養(yǎng)豐富，有較高的營養(yǎng)與保健價值。其中以其抑菌止瀉的藥用價值吸引了國內(nèi)外眾多學(xué)者的關(guān)注目光。由于楊梅中含有大量多酚、黃酮類有潛力的抑菌物質(zhì)，因此開發(fā)楊梅抑菌劑既可以充分利用現(xiàn)有資源又可以滿足現(xiàn)今消費者對食品安全日益提高的要求，具有廣闊的應(yīng)用前景。 本文首先采用水、乙醇(純)、丙酮、乙酸乙酯4種溶劑對楊梅果實中的有效抑菌物質(zhì)進(jìn)行粗提，并對比了4種粗提物對14種

2、革蘭氏陽性致病菌和革蘭氏陰性致病菌的抑菌特性。結(jié)果表明，4種提取物對14種致病菌均有較好的抑制作用(在p<0.05水平?jīng)]有顯著性差異)。相比之下，水提取物對甲型副傷寒沙門氏菌的抑菌活性最強(qiáng)；同時測定了水提取物對14株受試菌株的最低抑菌濃度(MIC)，甲型副傷寒沙門氏菌CMCC50093和李斯特菌ATCC35897、ATCC35152、ATCC33090最敏感，其MIC均為2.07mg浸膏/mL；乙型溶血性鏈球菌CMCC32210、金黃色

3、葡萄球菌ATCC6538、志賀氏痢疾桿菌CMCC51334、CMCC51573-10、副溶血性弧菌ATCC17803的MIC為4.14mg浸膏/mL，而對其他2種沙門氏菌CMCC50013、ATCC13076以及埃希氏大腸桿菌ATCC8099的抑菌效果相對較差，其MIC為8.28mg浸膏/mL。 測定了4種提取物中總黃酮、鞣質(zhì)和可滴定酸度，發(fā)現(xiàn)總黃酮含量差異顯著，而鞣質(zhì)和可滴定酸度含量的差異不顯著(p<0.05)。在對比楊梅提取

4、物的體內(nèi)外抑菌效果時，分別以模擬人工腸液和肉湯培養(yǎng)基為營養(yǎng)介質(zhì)，同時采用比濁法和活菌計數(shù)方法測定致病菌在楊梅水提物存在下的生長曲線。結(jié)果顯示，楊梅果實水提取物在模擬人工腸液介質(zhì)中對受試菌種的抑菌效果并不如在肉湯培養(yǎng)基介質(zhì)，這與酒浸楊梅可治療腹瀉的現(xiàn)象相悖。根據(jù)上述體內(nèi)外抑菌和成分分析結(jié)果，推測楊梅提取物中的鞣質(zhì)和有機(jī)酸可能是主要抑菌成分，可能是模擬人工腸液中的糖苷酶、蛋白酶等消化酶影響了鞣質(zhì)的抑菌活性。 為研究楊梅果實水提取物的

5、有效抑菌成分，采用溶劑分級法對鞣質(zhì)進(jìn)行分離純化，以金黃色葡萄球菌為代表菌，測定各分級產(chǎn)物的抑菌活性。發(fā)現(xiàn)乙醇、氯仿、石油醚只除去了粗提物中的糖類、蛋白質(zhì)、蠟質(zhì)以及脂類等非活性物質(zhì)；乙醚的分級物未顯現(xiàn)抑菌活性，說明粗提物中不含弱極性的多酚類物質(zhì)，而乙酸乙酯分級物和水的分級物均有明顯的抑菌活性，說明楊梅果實中的多酚類抑菌物質(zhì)為中等極性和強(qiáng)極性多酚類。另外還發(fā)現(xiàn)，乙酸乙酯分級所得楊梅多酚的抑菌活性隨乙醇溶液除雜時間的延長而有所增強(qiáng)。進(jìn)一步用單

6、因素及正交試驗對優(yōu)化乙醇純化過程。結(jié)果表明，乙醇處理時間對提取物的抑菌效果影響最為顯著，最佳條件為：處理時間24h；乙醇溶液濃度90％；溫度25℃。 采用紫外掃描、超高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用(UPLC-DAD-ESI-MS)等技術(shù)分析鑒定水和乙酸乙酯分級物中主要成分。發(fā)現(xiàn)水分級物中主要成分為矢車菊色素3-葡萄糖苷；乙酸乙酯分級物的主要成份為矢車菊色素3-葡萄糖苷、楊梅黃酮脫氧六碳糖苷、櫟精3-O-葡萄糖苷和櫟精脫氧六碳糖苷，其中矢車菊