盤狀結(jié)構(gòu)域酪氨酸激酶受體-2通過介導(dǎo)膠原與肝星狀細(xì)胞間的相互作用參與酒精性肝纖維化及肝竇毛細(xì)血管化.pdf

1、目的：通過建立酒精性肝纖維化大鼠模型，從組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)方面觀察肝纖維化的起始-肝竇毛細(xì)血管化的發(fā)生，探討MMP2、DDR2在酒精性肝纖維化大鼠肝竇毛細(xì)血管化病理進(jìn)程中的表達(dá)及可能發(fā)揮的作用，進(jìn)一步闡明酒精性肝纖維化的發(fā)病機制，并為下一步以DDR2為靶點治療酒精性肝纖維化提供實驗基礎(chǔ)。 材料與方法：50只雄性Wistar大鼠正常飼養(yǎng)1周后隨機分為3組：正常對照組(N組)、吡唑?qū)φ战M(P組)及模型組。模型組38只，橄欖油拌平衡飼料

2、喂養(yǎng)大鼠的基礎(chǔ)上給予每日兩次白酒、吡唑混合液胃內(nèi)灌注，白酒折算成酒精后其量及濃度每兩周遞增一次，吡唑按25mg/kg·d溶于灌胃酒精中。正常對照組(6只)給予等量生理鹽水每日兩次灌胃。吡唑?qū)φ战M(6只)給予模型組等量的吡唑溶于等量生理鹽水每日兩次灌胃。模型組分別于4周(M1組)、8周(M2組)、12周(M3組)和20周(M4組)隨機處死8只大鼠，正常對照組和吡唑?qū)φ战M于16周全部處死。取肝組織標(biāo)本，通過HE染色、Masson染色觀察肝臟

3、病理學(xué)改變，通過網(wǎng)狀纖維染色、免疫組化染色(I、Ⅳ型膠原及層粘連蛋白)及電鏡觀察肝竇毛細(xì)血管化的發(fā)生，最后通過熒光定量-PCR和Western blot檢測肝組織MMP2、DDR2基因和蛋白表達(dá)并與酒精性肝纖維化中肝竇毛細(xì)血管化的各項評價指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果：模型組隨造模時間延長依次出現(xiàn)肝組織脂肪變性、氣球樣變、炎癥及纖維化等病理過程，膠原纖維及網(wǎng)狀纖維沉積逐漸增多(P<0.05)，電鏡下肝竇內(nèi)皮細(xì)胞失窗孔及連續(xù)性基底膜形

4、成的現(xiàn)象與肝竇周Ⅳ型膠原及LN表達(dá)逐漸增加提示建模12周出現(xiàn)肝竇毛細(xì)血管化。DDR2、MMP2基因和蛋白量表達(dá)也隨建模進(jìn)行逐漸增加(P<0.05)。相關(guān)性分析顯示MMP2表達(dá)量與肝竇毛細(xì)血管化評價指標(biāo)(網(wǎng)狀纖維、Ⅳ型膠原、LN)呈正相關(guān)，同時DDR2表達(dá)量與MMP2表達(dá)量及肝竇毛細(xì)血管化評價指標(biāo)也呈正相關(guān)。正常對照組和吡唑?qū)φ战M病理檢測無明顯異常，且兩者之間各指標(biāo)無統(tǒng)計學(xué)差異，MMP2及DDR2微量表達(dá)。 結(jié)論通：過給予橄欖油拌