強(qiáng)血管生成促進(jìn)劑SDY-08的促組織修復(fù)作用.pdf

1、背景與目的：血管生成(angiogenesis)是指從已存在的微血管床上芽生出新的以毛細(xì)血管為主的血管系統(tǒng)的過程。這一過程包括毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移。在正常生理狀態(tài)下，人體血管內(nèi)皮細(xì)胞的倍增時(shí)間約為1年。人體只有在較特殊的環(huán)境下才會(huì)出現(xiàn)血管生成，例如創(chuàng)傷愈合，胚胎發(fā)生和女性經(jīng)期等。組織修復(fù)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一為血管新生，血管新生好壞直接影響組織修復(fù)的速度，因此血管再生調(diào)控一直是組織修復(fù)研究關(guān)注的焦點(diǎn)之一。自從70年代初。美國哈佛醫(yī)學(xué)院的

2、Folkman J博士[27]最早預(yù)言了用促進(jìn)血管生成即“治療性血管生成”的方法治療缺血性疾病的前景后，特別是近20年來，人們對(duì)血管生成因子，如血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)家族、成纖維細(xì)胞生長因子(fibroblast growth factor,FGF)家族和血管生成素(Angiopoietins)家族及它們的受體家族和血管生成抑制物(如血小板因子4、Angio

3、statin、Endostatin及Vasostatin等)進(jìn)行了廣泛而深入的研究，提出了內(nèi)源性血管生成因子與血管生成抑制因子間的“平衡與失衡”理論。在眾多血管生成因子中VEGF是最受關(guān)注的，它在組織修復(fù)過程中具有廣泛的調(diào)節(jié)作用。通過藥物的干預(yù)或促進(jìn)VEGF的表達(dá)與釋放從而達(dá)到治療目的，已經(jīng)成為組織修復(fù)研究中受到人們廣泛關(guān)注的入路。海洋生物體內(nèi)含有眾多的海洋生物活性物質(zhì)，從海洋生物活性物質(zhì)篩選新藥及其先導(dǎo)體，是新藥研究和開發(fā)的重要途徑。

4、SDY-08是本實(shí)驗(yàn)室從海洋生物中分離出來的一種活性成分，我們通過以下實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)血管生成和創(chuàng)傷愈合的影響并初步探討了其作用機(jī)理。方法：1.MTT法檢測(cè)SDY-08對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelialcells，HUVECs)生長的影響。2.建立雞胚絨毛尿囊膜(chick embryochorioallantoic membrane，CAM)模型，檢測(cè)SDY-08對(duì)CAM血管生成的影響

5、。3.建立小鼠皮膚創(chuàng)傷模型，檢測(cè)SDY-08對(duì)小鼠創(chuàng)傷愈合的影響。4.免疫組化法檢測(cè)SDY-08對(duì)創(chuàng)傷周圍組織血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響。5.蛋白免疫印跡法檢測(cè)SDY-08對(duì)HUVECs細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響。 結(jié)果：1.SDY-08可明顯促進(jìn)HUVECs細(xì)胞的生長，其誘導(dǎo)效果與SDY-08的劑量相關(guān)。終濃度為10、20、40和80μg/ml的SDY-08作用HUVECs細(xì)胞24h，其細(xì)胞增值誘導(dǎo)率(Promotion ra

6、te，PR)分別為7.8％、23.4％、79.2％和115.6％。終濃度為80μg/ml的SDY-08作用HUVECs細(xì)胞12h、24h和36h的細(xì)胞增值誘導(dǎo)率分別為28.1％、115.6％和81.4％。2.SDY-08能夠誘導(dǎo)CAM血管的生成，并與劑量相關(guān)。SDY-08(30μg/胚/天×3)、SDY-08(60μg/胚/天×3)、SDY-08(120μg/胚/天×3)、SDY-08對(duì)CAM血管生成的誘導(dǎo)率分別為27.9、47.4、和

7、70.9％。3.SDY-08顯著促進(jìn)小鼠創(chuàng)傷愈合。高劑量組第8天12只小鼠中有4只創(chuàng)傷愈合，而對(duì)照組第9天12只小鼠中才有1只愈合；經(jīng)SDY-08處理的小鼠第11天創(chuàng)傷全部愈合，且愈合的創(chuàng)面平滑，而對(duì)照組創(chuàng)面長期結(jié)痂，第11天只有6只愈合，第12天才全部愈合；SDY-08高劑量組創(chuàng)面愈合平均時(shí)間為9.1±1.3 d，較對(duì)照組11.2±0.92 d提前2天，差異非常明顯。4.SDY-08上調(diào)小鼠創(chuàng)傷周圍組織VEGF的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組的小鼠創(chuàng)傷

8、周圍組織血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿和胞膜VEGF表達(dá)呈陽性或強(qiáng)陽性，呈深棕黃色顆粒狀，局灶性或彌漫性分布，而對(duì)照組大多數(shù)細(xì)胞VEGF表達(dá)呈弱陽性。5.SDY-08上調(diào)HUVECs細(xì)胞VEGF的表達(dá)，并與劑量呈正相關(guān)。結(jié)論：1.SDY-08能促進(jìn)HUVECs細(xì)胞的生長，其作用效果與劑量成正相關(guān)。2.SDY-08能誘導(dǎo)CAM的血管生成，并與劑量成正相關(guān)。3.SDY-08具有促進(jìn)傷口愈合的作用。4.SDY-08能夠增強(qiáng)創(chuàng)傷組織血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF的表達(dá)