鐵牛七生物堿提取工藝及幾種烏頭屬藥材中三種二萜生物堿的HPLC同時測定研究.pdf

1、鐵牛七(Aconitum szechenyianum Gay．)為毛莨科植物鐵棒錘的干燥根莖，是我國西北地區(qū)民間常用道地草藥<'[1]>。中藥常以其根入藥，其性熱，味辛、苦，有大毒，具有活血祛瘀，祛風除濕，止痛消腫，興奮精神，消炎鎮(zhèn)痛等功效。烏頭類生物堿在鐵牛七藥用中起著重要作用。盡管鐵牛七在民間廣泛運用，但關(guān)于它的化學成分的研究很少，而關(guān)于生物堿的提取及測定還未見報道。本文依次利用L<,16>(4<'5>)正交實驗和幾個單因素實驗來優(yōu)

2、化鐵牛七中總生物堿和烏頭堿的提取工藝，然后利用優(yōu)化總生物堿得到的提取條件對常見的4種烏頭屬藥材的生物堿進行提取并利用建立的HPLC-PDA方法對這幾種實際樣品中的烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿含量進行同時測定。 本論文分綜述和實驗報告兩部分內(nèi)容。 第一部分：綜述1烏頭屬植物研究概況烏頭屬植物的研究概況主要涉及烏頭屬植物的化學成分研究和烏頭屬植物的藥理和毒性作用研究。烏頭屬植物的化學成分一般包括多糖、蛋白質(zhì)、揮發(fā)油、微量元素、

3、生物堿等多種成分。烏頭屬植物具有廣泛的生理活性，如可以治療風濕性關(guān)節(jié)炎、類風濕性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷、腰腿疼、勞傷、無名腫瘤、凍瘡、毒蛇咬傷、抗腫瘤等疾病。烏頭屬植物中的生物堿成分特別是二萜類生物堿劇毒，使用不當常會引起中毒。 生物堿的研究進展生物堿是烏頭屬植物中主要的生理活性成分。生物堿的研究進展主要涉及生物堿化學成分來源、性質(zhì)、提取及分離方法、檢測方法等。 第二部分：研究報告本部分包括二個實驗報告：鐵牛七生物堿提取工藝考

4、察；高效液相色譜法同時測定4種烏頭屬植物6個實際藥材樣品中的三種二萜生物堿。 根據(jù)有關(guān)文獻資料選定L<,16>(4<'5>)正交表分別進行16組實驗設計下的生物堿單次提取。鐵牛七藥材被粉碎并通過0.45μm過濾篩后準確稱量10.0 g進行回流提取，回流后的過濾液在減壓除去乙醇后用一定濃度的氨水堿化到pH10，此溶液再在分液漏斗中用三氯甲烷萃取3次，合并三氯甲烷萃取液得生物堿提取物。將其均勻分為兩份，揮干，分別進行總堿和烏頭堿的測

5、定。以酸性染料比色法測定總生物堿含量，以高效液相色譜法測定烏頭堿含量，對鐵牛七中生物堿的提取條件進行優(yōu)化。所得結(jié)果再結(jié)合單因素輪換法對提取次數(shù)等條件作進一步考察，結(jié)果表明總堿和烏頭堿具有不同的最佳提取條件，方法簡單、重現(xiàn)性好。然后利用優(yōu)化總堿得到的最佳提取條件對川烏、草烏、金牛七、鐵牛七(a,b,c)中的生物堿進行提取，并利用高效液相色譜二極管陣列檢測器外標法進行新烏頭堿、烏頭堿、次烏頭堿三種二萜生物堿的同時測定。三種生物堿在濃度1.0

6、-200.0μg/mL范圍內(nèi)都有良好的線性關(guān)系(r>0.999)。實驗中考察了三種生物堿的日內(nèi)、日間精密度，高、中、低濃度的回收率，高效液相色譜法的理論塔板數(shù)。結(jié)果表明此方法精密度高、重復性好，適用于這幾種烏頭屬藥材中的三種二萜生物堿的同時測定；同時也表明實際樣品中生物堿含量隨著藥材種屬甚至同種藥材的不同采收時間、不同種植地點而發(fā)生變化。藥材質(zhì)量受許多因素如采收時間、生長環(huán)境、地點等的影響，因此建立中藥材質(zhì)量控制標準成為中藥現(xiàn)代化的首要