甘青烏頭生物堿的提取、分離和藥理活性研究.pdf

1、甘青烏頭為毛茛科烏頭屬植物唐古特烏頭Aconitum tanguticum(Maxim.) Stapf的干燥全草，為高山珍稀藥材，性涼味苦，具有清熱解毒，生肌燥濕的功效，其主要藥效成分為生物堿、苷類、揮發(fā)油等，其中生物堿具有廣泛的藥理活性。
　　采用90％乙醇對甘青烏頭進行提取，得率為17.65％，并用不同極性有機溶劑進行萃取分離，用藥效學技術方法觀察測定甘青烏頭醇提物(EE)、石油醚萃取部分(PE)、乙酸乙酯萃取部分(EA)、氯

2、仿萃取部分(CH)、正丁醇萃取部分(BU)和水溶性部分(WA)對非特異性急、慢性炎癥反應的影響，測定EE、PE、EA、CH、BU和WA對冰醋酸致小鼠扭體反應和熱刺激痛閾的影響，比較分析其抗炎鎮(zhèn)痛作用;研究發(fā)現甘青烏頭具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛作用，醇提物具有較強的抗炎鎮(zhèn)痛活性，初步篩選發(fā)現氯仿萃取部位是抗炎鎮(zhèn)痛的主要藥效物質群，其他部位亦具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛活性，相對較弱。
　　根據甘青烏頭抗炎鎮(zhèn)痛作用的藥效物質主要集中在醇提物的氯仿萃取部

3、位，并且發(fā)現含有生物堿，于是對甘青烏頭的總生物堿(TAA)進行提取，并對TAA進行定性定量分析和質量評價結果顯示含生物堿（以烏頭堿計）為0.3323％，建立了比較穩(wěn)定的TAA含量測定方法，并采用Box-Behnken Design設計實驗方案，以總生物堿和酯型生物堿含量為指標，在單因素試驗基礎上，優(yōu)選TAA的提取工藝，獲得最佳工藝條件為提取溫度85℃，提取時間1.5h，乙醇質量分數90％，液料比15∶1，該工藝條件下TAA和酯型生物堿含

4、量分別為0.5360g/100g提取物和0.5030μg/mg總堿，且重現性好，可作為TAA提取的新工藝。
　　選擇兩種給藥途徑研冗TAA對小鼠灌胃和腹腔注射時的急性毒性，并測定LD50，初步評價其安全性，研究發(fā)現TAA灌胃給藥的LD50為0.7456g/kg，TAA腹腔注射給藥的LD50為0.3358g/kg，研究證實TAA經灌胃和腹腔注射對小鼠均具有一定的急性毒性，初步判斷TAA急性中毒的靶器官為植物神經系統(tǒng)和運動神經系統(tǒng)，中

5、毒較快，持續(xù)時間較短。進一步藥效學研究發(fā)現TAA對非特異性急性炎癥反應和慢性炎癥性組織增生具有明顯抑制作用，也具有一定的鎮(zhèn)痛作用。
　　采用脂多糖(LPS)誘導建立大鼠急性肺損傷(ALI)模型，研究TAA對ALI模型大鼠的治療作用及作用機制，結果表明TAA通過其抗炎活性保護肺功能，且無顯著的肺組織細胞毒性，TAA對LPS誘導的ALI的保護作用是通過改善肺組織病理變化，抑制NF-κB活化，減少炎性細胞浸潤、血管滲出等實現的，結果顯示

6、抑制前炎癥轉錄因子NF-κB以及炎癥介質TNF-α、IL-6和IL-1β是主要的作用機制，初步表明TAA可作為急性肺損傷的有效治療物質。
　　采用甲氨蝶呤誘導建立大鼠急性出血性腸炎(AHE)模型，研究TAA對AHE模型大鼠的治療作用及作用機制，研究發(fā)現TAA灌胃后能明顯改善AHE模型大鼠的一般狀況，改善組織形態(tài)，降低血清TNF-α和NO含量，上調回腸組織勻漿DAO、ICAM-1和MPO水平，表明TAA可有效保護腸黏膜的機械屏障，具

7、有良好的抗炎作用，初步表明TAA可作為急性腸炎的有效治療物質。
　　選擇常見致病菌金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大腸桿菌(Escherichia coli)、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa），糞腸球菌（Enterococcus faecalis）和白色念珠菌(Candidaalbicans)為研究對象進行抗菌試驗，研究發(fā)現TAA對G+菌及G-菌抗菌活性較強，而對真菌在1.