氟康唑?qū)ERG鉀通道電生理功能的影響.pdf

1、目的：
　　 研究氟康唑?qū)σ吧蚳ERG(wild type hERG，WT-hERG)鉀通道電流和Y652和F656位點(diǎn)突變的hERG鉀通道電流的作用，探討其延長(zhǎng)QT間期的作用機(jī)制，從而為氟康唑在臨床上的安全使用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.采用磷酸鈣瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方法把WT-hERG轉(zhuǎn)染進(jìn)人胚腎細(xì)胞(HumanEmbryonic Kidney，HEK293)，應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄氟康唑?qū)EK293

2、細(xì)胞上的hERG鉀電流及其動(dòng)力學(xué)曲線的影響(激活、失活)。
　　 2.把Y652和F656位點(diǎn)突變的hERG轉(zhuǎn)染進(jìn)HEK293細(xì)胞，記錄氟康唑?qū)EK293細(xì)胞上的Y652A-hERG和F656C-hERG鉀電流，并比較氟康唑?qū)T-hERG和突變hERG鉀電流的作用。
　　 結(jié)果：
　　 1.氟康唑濃度依賴性的抑制WT-hERG鉀通道時(shí)間依賴性電流和尾電流，其半數(shù)最大抑制濃度(Half-maximum bloc

3、k concentrations，IC50)為48.2±9.4μM。
　　 2.氟康唑?qū)T-HERG鉀通道的激活曲線和穩(wěn)態(tài)失活曲線沒(méi)有顯著影響。10μM的氟康唑作用前后：對(duì)激活曲線，半數(shù)最大激活電壓V1/2從-3.9±0.3 mV變化為-6.3±0.5 mV(P>0.05，n=9)，激活系數(shù)k由10.4±0.3變?yōu)?0.3±0.4(P>0.05，n=9)；對(duì)穩(wěn)態(tài)失活曲線，半數(shù)失活電位V1/2由-43.3±0.8 mV變化為-4

4、3.1±0.9 mV(P>0.05，n=9)，失活系數(shù)k由22.9±0.6 mV變化為23.6±0.8 mV(P>0.05，n=9)。其差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著意義。
　　 3.氟康唑?qū)652A-hERG和F656C-hERG的抑制作用與WT-hERG相比大大減弱。在300μM的氟康唑作用下，對(duì)Y652A-hERG，氟康唑抑制WT-hERG為61.1±2.7％，而抑制Y652A-hERG為22.8±5.6％；對(duì)F656C-hERG

5、，氟康唑抑制WT-hERG為41.7±3.7％，而抑制F656C-hERG為29.8±6.3％，其結(jié)果在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯著意義(P<0.01，ANOVA)。
　　 結(jié)論：
　　 1.氟康唑能夠顯著抑制轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-hERG鉀通道的HEK293細(xì)胞的鉀電流，且抑制呈濃度依賴性而不具有頻率依賴性。
　　 2.氟康唑不影響WT-hERG轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞鉀通道的激活動(dòng)力學(xué)和失活動(dòng)力學(xué)特征。
　　 3.氟康唑?qū)6區(qū)