心臟HERG鉀通道相互作用蛋白的篩選及其對該通道調(diào)控功能的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：篩選與心臟HERG鉀通道存在相互作用的蛋白質(zhì)，在哺乳細(xì)胞中驗(yàn)證所篩選出的蛋白質(zhì)與HERG之間的相互作用，并進(jìn)一步研究該相互作用蛋白對HERG鉀通道的調(diào)控作用。
　　 方法：⑴以帶有編碼人類心臟HERG 鉀通道的cDNA為模板，通過PCR方法得到編碼人類心臟HERG鉀通道氨基末端（404個(gè)氨基酸）的DNA片段。將該片段克隆入pGBKT7載體， 構(gòu)建“誘餌”質(zhì)粒pGBKT7-HERG-NT。⑵應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)篩選人類心臟cD

2、NA文庫。⑶以PCR法擴(kuò)增FHL2基因的開放讀框片段(ORF)，并克隆入pcDNA3.0 載體和pGEX-4T1載體。⑷應(yīng)用免疫共沉淀、GSTpull-down分析和熒光免疫組織化學(xué)分析驗(yàn)證HERG 與FHL2之間存在相互作用。⑸應(yīng)用膜片鉗技術(shù)，研究FHL2對HERG鉀通道功能的影響。
　　 結(jié)果：①用酵母雙雜交技術(shù)篩選得到37個(gè)陽性克隆，其中含有表達(dá)FHL2蛋白的克隆。免疫共沉淀、GST pull-down和熒光免疫組織化學(xué)分

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