酶解小麥蛋白對熱應激小鼠生理功能的影響.pdf

1、本研究主要包括兩部分內(nèi)容：一、小麥蛋白的酶解及酶解物成分的測定；二、日糧添加小麥蛋白酶解物對熱應激小鼠的影響研究。 第一部分：小麥蛋白的酶解及酶解物的測定 小麥蛋白的酶解：本試驗選用粗蛋白質(zhì)為77％的小麥蛋白粉，添加Protamex復合蛋白酶，在底物濃度[S]為4.0％(w/w)，酶與底物比E/S為5％(w/w)，40℃，pH6.5的條件下，反應2 h后，沸水浴15 min終止水解。 小麥蛋白酶解物的成分分析：采

2、用凝膠排阻色譜法測定酶解物中肽相對分子量分布；采用反相高效液相色譜進行梯度洗脫，外標法定量測定水解物中的十七種基本氨基酸；同時采用雙氟乙酸基碘苯(BTI)保護肽中非N端谷氨酰胺，使其在隨后的酸水解過程中不會轉化成谷氨酸，間接測定肽中有效谷氨酰胺含量。 測定結果表明：酶解物的水解度為15.62％。酶解物中含有76.27％相對分子量小于1400 Da的小肽，其中300-700 Da的小肽(大約為2-5肽)占60.68％。酶解物中游離

3、在水中的總氨基酸量為31.82 mg/mL，谷氨酸含量為12.59 mg/mL，谷氨酸占總氨基酸的39.57％；肽中有效谷氨酰胺含量為2.54 mg/mL，占總氨基酸的7.99％。 第二部分：添加小麥蛋白酶解物對熱應激小鼠生長性能、腸道功能、免疫功能、小腸抗氧化能力的影響 采用單因子試驗設計，選擇72只25-28日齡健康雌性昆明小鼠，隨機分為4個處理，每個處理設3個重復，每重復(籠)6只。處理Ⅰ為對照組，在基礎日糧上添加

4、1.0％小麥蛋白；處理Ⅱ、處理Ⅲ、處理Ⅳ為試驗組，在基礎日糧上分別添加0.2％、1.0％、1.8％的小麥蛋白的酶解物，試驗在平均溫度33℃，平均相對濕度77.5％，平均溫濕指數(shù)(THI)為87.27的熱應激條件下飼養(yǎng)28 d。在試驗的第14 d和28 d，各處理每重復隨機選取3只，進行相關指標的測定，研究日糧中添加小麥蛋白酶解物對熱應激小鼠生長性能、免疫功能、腸道功能、小腸抗氧化能力的影響。 試驗結果表明： 1、添加小麥

5、蛋白酶解物對熱應激小鼠生長性能的影響 添加小麥蛋白酶解物對熱應激不同試驗階段小鼠(1-14 d、15-28 d)的采食量、日增重和料重比無顯著影響(P>0.05)。但對試驗全期(1-28 d)分析，不同添加量的小麥蛋白酶解物對小鼠采食量、日增重有不同程度的提高，料重比有不同程度的降低；與對照組相比，0.2％小麥蛋白酶解物(Wheat gluten hydrolysates，WGH)處理組熱應激小鼠的采食量極顯著提高(P<0.01

6、)，日增重顯著增加(P<0.05)；1.8％WGH處理組的小鼠料重比最低，比對照組低25.23％(P>0.05)。 2、添加小麥蛋白酶解物對熱應激小鼠免疫功能的影響 添加小麥蛋白酶解物能提高熱應激小鼠脾臟指數(shù)和肝臟指數(shù)，提高小鼠小腸組織的白細胞介素2(Interleukin-2，IL-2)含量與分泌型免疫球蛋白A(Secretory immunoglobulin A.sigA)含量。小麥蛋白酶解物處理組脾臟指數(shù)的提高不顯

7、著(P>0.05)，且不同時間段出現(xiàn)不同的添加量效應。試驗前期(1-14 d)，1.8％WGH處理組的小鼠肝臟指數(shù)比對照組提高7.54％(P<0.05)；試驗后期(15-28 d)，1.0％WGH處理組和1.8％WGH處理組的小鼠肝臟指數(shù)分別比對照組提高9.69％(P<0.05)和8.51％(P<0.05)。除試驗前期(1-14 d)，0.2％WGH處理組的IL-2和SIgA含量與對照組差異顯著外(P<0.05)，其余各處理組的IL-2

8、和SIgA含量均與對照組有極顯著差異(P<0.01). 3、添加小麥蛋白酶解物對熱應激小鼠腸道功能的影響 試驗前期(1-14d)，1.8％WGH處理組的小鼠腸道長度比對照組長7.27％(P<0.05)，試驗后期(15-28 d)，0.2％WGH處理組比對照組短5.47％(P<0.05)，其它均無顯著的差異(P>0.05)；小麥蛋白酶解物組腸道重量與對照組相比有不同程度提高，但無顯著差異(P>0.05)；1.0％WGH處理

9、組和1.8％WGH處理組的小鼠小腸肌層厚度、絨毛高度、絨毛高度/隱窩深度比對照組均有顯著提高(P<0.05)；試驗前期(1-14d)，小麥蛋白酶解物組隱窩深度與對照組差異均不顯著(P>0.05)，但有下降的趨勢；試驗后期(15-28 d)，0.2％WGH處理組和1.0％WGH處理組的小鼠隱窩深度分別比對照組降低28.35％(P<0.05)和35.82％(P<0.01)。1.0％WGH處理組和1.8％WGH處理組的小鼠D-木糖吸收能力均極

10、顯著高于對照組(P<0.01).本試驗條件下，小麥蛋白水解物的添加量為1.0％時，對小鼠小腸黏膜形態(tài)的改善和腸道吸收能力的提高效果最好。 4、添加小麥蛋白酶解物對熱應激小鼠小腸組織抗氧化能力的影響 小麥蛋白酶解物對熱應激小鼠小腸組織抗氧化能力有顯著的影響。與對照組相比，1.0％WGH處理組和1.8％WGH處理組的熱應激小鼠小腸組織的谷胱甘肽(Glutathione，GSH)和過氧化氫酶(catalase，CAT)水平都有