膿毒癥導致多臟器功能衰竭過程中器官損害特點及NF-κB結合活性的隨齡改變在感染導致MODSE啟動機制中的意義.pdf

1、目的：感染是MODS的主要誘因之一，高齡是膿毒癥誘發(fā)MODS預后不良的獨立危險因素，而對于膿毒癥導致老年多器官功能不全綜合征(MODSE)的病理變化特點及其可能的啟動機制，存在不同的結論及假說。IL-6水平在膿毒癥過程中對判斷預后具有重要意義。NF-κB是膿毒癥IL-6表達的主要調(diào)控因子，本研究旨在了解膿毒癥導致MODSE過程中，各器官損害的時序及程度變化，確定MODSE發(fā)生的早期預警指標，分析膿毒癥過程中各器官NF-κB——IL-6炎

2、性通路活性的隨齡變化，以了解感染導致MODSE的可能啟動機制。 材料和方法：1、生存指標研究：以幼齡(8周齡)及老齡(18月齡)KM小鼠為實驗對象，進行兩種不同程度的盲腸結扎穿孔(CLP)手術：(1)100％長度盲腸結扎、21G針頭穿孔兩次；(2)50％長度盲腸結扎、21G針頭穿孔一次；假手術組只行剖腹盲腸探查術。在術后96小時內(nèi)定期，對不同年齡、不同手術處理組小鼠的生存率、生存質(zhì)量指標(體溫、體重、運動水平、飲水量、攝食量)進

3、行監(jiān)測。 2、膿毒癥早期器官損害順序及程度研究：以幼齡(8周齡)及老齡(18月齡)KM小鼠為實驗對象，以檢測時間(術后4、8小時)進行分組，行改變后的CLP手術：50％長度盲腸結扎、21G穿孔一次；假手術組只行盲腸探查術。在術后不同時間點測體溫，并以經(jīng)膈穿刺法對小鼠進行心功能檢測后處死取血及各器官組織標本，檢測血氣、靜脈血GLU、BUN、Cr、ALT、AST、水平，以ELISA法測定血清IL-6水平，各器官取下組織進行MPO活性

4、檢測，并計算組織干濕比、以病理評分法測定肺組織病理積分。 3、各器官膿毒癥初期IL-6表達水平及NF-κB結合活性變化與增齡關系的研究：以幼齡(8周齡)及老齡(18月齡)KM小鼠為實驗對象，行改變后的的CLP手術：50％長度盲腸結扎、21G穿孔一次；假手術組只行剖腹盲腸探查術。術后4小時處死取靜脈血及心臟、肝臟、肺臟組織，以ELISA法測定血清IL-6水平，以Westernblot測定各組織IL-6蛋白含量，以半定量RT-PCR

5、法測定各組織IL-6mRNA水平，以EMSA法測定各組織NF-κB結合活性。 4、統(tǒng)計處理：計量資料采用均數(shù)±標準差方法表示，分析各指標隨齡差異時應用的兩組數(shù)據(jù)均數(shù)比較采用t檢驗，采用單因素方差分析比較多組指標均數(shù)差異。P＜0.05表示數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學意義。所有數(shù)據(jù)均經(jīng)STAT7.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理， 結果：1、傳統(tǒng)致死性CLP手術(100％長度盲腸結扎、21G穿孔兩次)處理后，老齡小鼠與幼齡小鼠相比生存率無明顯差

6、異，均于術后48小時內(nèi)死亡；改變后的亞致死性CLP手術(50％長度盲腸結扎、21G穿孔一次)老齡小鼠術后5日生存率為30％，幼齡小鼠術后5日全部存活，增齡相關的生存率差異顯著(p＜0.05)采用改變后CLP手術的老齡小鼠各生存質(zhì)量指標與幼鼠差異明顯，但術后早期(術后4、8、12小時)各生存質(zhì)量指標中僅體溫指標與生存率相關。 2、采用改變后的CLP手術處理對不同年齡小鼠進行膿毒癥早期器官損害順序及程度研究，結果發(fā)現(xiàn)，老齡小鼠于術后

7、8小時出現(xiàn)低動力循環(huán)狀態(tài)，且老齡小鼠左室心肌動力學指標損害均比幼鼠明顯；各年齡組肝臟組織在術后8小時內(nèi)未出現(xiàn)明顯結構損害征象：血清酶學、MPO活性、干濕比無明顯變化；肺臟組織術后4小時即出現(xiàn)病理積分、MPO活性、干濕比升高，且有隨齡升高的現(xiàn)象，老齡動物血氣指標的變化也早于幼鼠。靜脈血IL-6水平分析發(fā)現(xiàn)CLP手術處理后老齡小鼠各時間段IL-6水平均顯著高于幼鼠。對于各器官損害指標進行與體溫指標的相關性分析發(fā)現(xiàn)，CLP處理后老齡小鼠各時間

8、段肺部病理積分與體溫指標存在負相關關系。 3、行改變后的CLP術后4小時，老齡小鼠靜脈血IL-6水平高于幼鼠，Westernblot分析表明僅肺組織IL-6蛋白含量存在明顯隨齡差異，RT-PCR結果表明CLP術后4小時肝臟組織和肺組織出現(xiàn)明顯IL-6mRNA表達，但是僅肺組織IL-6mRNA表達水平存在明顯隨齡差異，對心、肝、肺臟組織的核提取物進行EMSA的結果表明，老齡CLP小鼠肺部組織NF-κB結合活性明顯高于幼鼠。

9、 結論：1、相比于傳統(tǒng)的CLP模型，改變后的亞致死性CLP模型更適于研究增齡對膿毒癥引發(fā)MODSE的機制研究； 2、CLP術后早期低體溫是膿毒癥導致MODSE及預后不良的早期預警指標； 3、肺組織是膿毒癥性MODSE中最早受累的器官，肺組織在膿毒癥早期炎癥反應程度可以作為預后的判斷指標。 4、IL-6水平在膿毒癥中隨齡升高可能是老齡成為膿毒癥MODSE不良預后危險因素的重要原因，同樣感染負荷下，老齡動物膿毒癥心功