膿毒癥導(dǎo)致多臟器功能衰竭過程中器官損害特點(diǎn)及NF-κB結(jié)合活性的隨齡改變?cè)诟腥緦?dǎo)致MODSE啟動(dòng)機(jī)制中的意義.pdf

1、目的：感染是MODS的主要誘因之一，高齡是膿毒癥誘發(fā)MODS預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，而對(duì)于膿毒癥導(dǎo)致老年多器官功能不全綜合征(MODSE)的病理變化特點(diǎn)及其可能的啟動(dòng)機(jī)制，存在不同的結(jié)論及假說。IL-6水平在膿毒癥過程中對(duì)判斷預(yù)后具有重要意義。NF-κB是膿毒癥IL-6表達(dá)的主要調(diào)控因子，本研究旨在了解膿毒癥導(dǎo)致MODSE過程中，各器官損害的時(shí)序及程度變化，確定MODSE發(fā)生的早期預(yù)警指標(biāo)，分析膿毒癥過程中各器官NF-κB——IL-6炎

2、性通路活性的隨齡變化，以了解感染導(dǎo)致MODSE的可能啟動(dòng)機(jī)制。 材料和方法：1、生存指標(biāo)研究：以幼齡(8周齡)及老齡(18月齡)KM小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，進(jìn)行兩種不同程度的盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)手術(shù)：(1)100％長(zhǎng)度盲腸結(jié)扎、21G針頭穿孔兩次；(2)50％長(zhǎng)度盲腸結(jié)扎、21G針頭穿孔一次；假手術(shù)組只行剖腹盲腸探查術(shù)。在術(shù)后96小時(shí)內(nèi)定期，對(duì)不同年齡、不同手術(shù)處理組小鼠的生存率、生存質(zhì)量指標(biāo)(體溫、體重、運(yùn)動(dòng)水平、飲水量、攝食量)進(jìn)

3、行監(jiān)測(cè)。 2、膿毒癥早期器官損害順序及程度研究：以幼齡(8周齡)及老齡(18月齡)KM小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，以檢測(cè)時(shí)間(術(shù)后4、8小時(shí))進(jìn)行分組，行改變后的CLP手術(shù)：50％長(zhǎng)度盲腸結(jié)扎、21G穿孔一次；假手術(shù)組只行盲腸探查術(shù)。在術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)體溫，并以經(jīng)膈穿刺法對(duì)小鼠進(jìn)行心功能檢測(cè)后處死取血及各器官組織標(biāo)本，檢測(cè)血?dú)?、靜脈血GLU、BUN、Cr、ALT、AST、水平，以ELISA法測(cè)定血清IL-6水平，各器官取下組織進(jìn)行MPO活性

4、檢測(cè)，并計(jì)算組織干濕比、以病理評(píng)分法測(cè)定肺組織病理積分。 3、各器官膿毒癥初期IL-6表達(dá)水平及NF-κB結(jié)合活性變化與增齡關(guān)系的研究：以幼齡(8周齡)及老齡(18月齡)KM小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，行改變后的的CLP手術(shù)：50％長(zhǎng)度盲腸結(jié)扎、21G穿孔一次；假手術(shù)組只行剖腹盲腸探查術(shù)。術(shù)后4小時(shí)處死取靜脈血及心臟、肝臟、肺臟組織，以ELISA法測(cè)定血清IL-6水平，以Westernblot測(cè)定各組織IL-6蛋白含量，以半定量RT-PCR

5、法測(cè)定各組織IL-6mRNA水平，以EMSA法測(cè)定各組織NF-κB結(jié)合活性。 4、統(tǒng)計(jì)處理：計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差方法表示，分析各指標(biāo)隨齡差異時(shí)應(yīng)用的兩組數(shù)據(jù)均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，采用單因素方差分析比較多組指標(biāo)均數(shù)差異。P＜0.05表示數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有數(shù)據(jù)均經(jīng)STAT7.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理， 結(jié)果：1、傳統(tǒng)致死性CLP手術(shù)(100％長(zhǎng)度盲腸結(jié)扎、21G穿孔兩次)處理后，老齡小鼠與幼齡小鼠相比生存率無明顯差

6、異，均于術(shù)后48小時(shí)內(nèi)死亡；改變后的亞致死性CLP手術(shù)(50％長(zhǎng)度盲腸結(jié)扎、21G穿孔一次)老齡小鼠術(shù)后5日生存率為30％，幼齡小鼠術(shù)后5日全部存活，增齡相關(guān)的生存率差異顯著(p＜0.05)采用改變后CLP手術(shù)的老齡小鼠各生存質(zhì)量指標(biāo)與幼鼠差異明顯，但術(shù)后早期(術(shù)后4、8、12小時(shí))各生存質(zhì)量指標(biāo)中僅體溫指標(biāo)與生存率相關(guān)。 2、采用改變后的CLP手術(shù)處理對(duì)不同年齡小鼠進(jìn)行膿毒癥早期器官損害順序及程度研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，老齡小鼠于術(shù)后

7、8小時(shí)出現(xiàn)低動(dòng)力循環(huán)狀態(tài)，且老齡小鼠左室心肌動(dòng)力學(xué)指標(biāo)損害均比幼鼠明顯；各年齡組肝臟組織在術(shù)后8小時(shí)內(nèi)未出現(xiàn)明顯結(jié)構(gòu)損害征象：血清酶學(xué)、MPO活性、干濕比無明顯變化；肺臟組織術(shù)后4小時(shí)即出現(xiàn)病理積分、MPO活性、干濕比升高，且有隨齡升高的現(xiàn)象，老齡動(dòng)物血?dú)庵笜?biāo)的變化也早于幼鼠。靜脈血IL-6水平分析發(fā)現(xiàn)CLP手術(shù)處理后老齡小鼠各時(shí)間段IL-6水平均顯著高于幼鼠。對(duì)于各器官損害指標(biāo)進(jìn)行與體溫指標(biāo)的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，CLP處理后老齡小鼠各時(shí)間

8、段肺部病理積分與體溫指標(biāo)存在負(fù)相關(guān)關(guān)系。 3、行改變后的CLP術(shù)后4小時(shí)，老齡小鼠靜脈血IL-6水平高于幼鼠，Westernblot分析表明僅肺組織IL-6蛋白含量存在明顯隨齡差異，RT-PCR結(jié)果表明CLP術(shù)后4小時(shí)肝臟組織和肺組織出現(xiàn)明顯IL-6mRNA表達(dá)，但是僅肺組織IL-6mRNA表達(dá)水平存在明顯隨齡差異，對(duì)心、肝、肺臟組織的核提取物進(jìn)行EMSA的結(jié)果表明，老齡CLP小鼠肺部組織NF-κB結(jié)合活性明顯高于幼鼠。

9、 結(jié)論：1、相比于傳統(tǒng)的CLP模型，改變后的亞致死性CLP模型更適于研究增齡對(duì)膿毒癥引發(fā)MODSE的機(jī)制研究； 2、CLP術(shù)后早期低體溫是膿毒癥導(dǎo)致MODSE及預(yù)后不良的早期預(yù)警指標(biāo)； 3、肺組織是膿毒癥性MODSE中最早受累的器官，肺組織在膿毒癥早期炎癥反應(yīng)程度可以作為預(yù)后的判斷指標(biāo)。 4、IL-6水平在膿毒癥中隨齡升高可能是老齡成為膿毒癥MODSE不良預(yù)后危險(xiǎn)因素的重要原因，同樣感染負(fù)荷下，老齡動(dòng)物膿毒癥心功