冷凍保存對延邊黃牛體細(xì)胞培養(yǎng)及核移植效率的影響.pdf

1、本實驗對延邊黃牛耳皮膚成纖維細(xì)胞冷凍保存及作為核移植供體細(xì)胞對重組胚發(fā)育的影響進(jìn)行了研究。實驗以延邊黃牛耳皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)、冷凍保存為基礎(chǔ)，使用了組織塊法和酶法結(jié)合，成功的培養(yǎng)出了延邊黃牛耳皮膚成纖維細(xì)胞系，對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行冷凍保存，并觀察其解凍后細(xì)胞的生長情況，探索出最佳的冷凍保存體系。并將冷凍解凍后的成纖維細(xì)胞作為核供體，進(jìn)行體細(xì)胞核移植。結(jié)果表明：
　　1.通過組織塊法+酶法培養(yǎng)，獲得了延邊黃牛成纖維細(xì)胞系。進(jìn)行冷凍的組織

2、塊在解凍后同樣能培養(yǎng)出細(xì)胞。與未冷凍組織比較，活組織塊數(shù)目減少，凍存組織的細(xì)胞游離及貼壁時間增加；
　　2.冷凍復(fù)蘇后的延邊黃牛成纖維細(xì)胞，在復(fù)蘇后2～4h即開始貼壁，24h大部分細(xì)胞已經(jīng)貼壁，貼壁率可達(dá)到76％。解凍后細(xì)胞培養(yǎng)傳代2～3代后，細(xì)胞的生長速度和形態(tài)與凍存前無太大差異；
　　3．細(xì)胞凍存試驗中，以甘油、DMSO和乙二醇為冷凍保護(hù)劑，添加20%血清的DMEM為基礎(chǔ)液，得到最適合實驗操作的冷凍保護(hù)劑為甘油濃度10%

3、，能滿足延邊黃牛耳皮膚成纖維細(xì)胞長期保存的需要；
　　4．從生長曲線可以看出，以低糖DMEM培養(yǎng)的冷凍后延邊黃牛耳皮膚成纖維細(xì)胞，傳代后滯留期短，約1～2天，之后為對數(shù)生長期，持續(xù)六天左右，第7天達(dá)到高峰，第8天細(xì)胞接觸抑制出現(xiàn)死亡，細(xì)胞數(shù)量開始減少，進(jìn)入平臺期，凍存后細(xì)胞的生長規(guī)律與未進(jìn)行冷凍細(xì)胞的基本一致；
　　5.實驗對冷凍前后的延邊黃牛皮膚成纖維細(xì)胞作了染色體檢查，結(jié)果表明：冷凍后的細(xì)胞仍然保留著染色體數(shù)目的完整性，