磁性納米四氧化三鐵顆粒對藤黃酸誘導的白血病細胞凋亡效應的影響.pdf

1、目的：本課題旨在觀察磁性納米四氧化三鐵顆粒[magnetic nanoparticle of Fe3O4，MNP（Fe3O4）]對藤黃酸（gambogic acid，GA）誘導的K562和U937白血病細胞凋亡效應的影響，并通過測定Bcl-2，Bax，Caspase-3，NF-κB和Survivin的轉(zhuǎn)錄與表達情況探討可能的機制，為臨床白血病的治療提供一定的理論依據(jù)。
　　 方法（1）應用四甲基偶氮唑藍（MTT）比色法分析單獨及

2、聯(lián)合應用MNP（Fe3O4）和GA對K562和U937細胞的細胞毒作用。（2）應用流式細胞術（flow cytometry，F(xiàn)CM）分別檢測單獨及聯(lián)合應用MNP（Fe3O4）和GA后K562和U937細胞的凋亡率。（3）采用普通光學顯微鏡和熒光顯微鏡觀察藥物作用前后K562和U937細胞的形態(tài)特征。（4）采用實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（real time reverse transcript polymerase chain react

3、ion，Real time RT-PCR）和蛋白免疫印跡法（western blot，WB）檢測藥物作用前后Bcl-2，Bax，Caspase-3，NF-κB和Survivin的mRNA和蛋白水平。
　　 結果（1）MTT結果顯示：①GA對K562和U937細胞的抑制作用有濃度和時間依賴性，作用48h的IC50值分別為1.13mg/L和0.41mg/L；②20mg/L濃度以下的MNP（Fe3O4）對U937細胞無明顯生長抑制作用

4、，與空白對照組相比差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05）；③GA與5～20mg/L MNP（Fe3O4）聯(lián)合應用后，K562和U937細胞的生長較單用GA不同程度受抑，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05），其中GA與10mg/L MNP（Fe3O4）聯(lián)合應用使K562和U937細胞48h的IC50值分別降為0.72mg/L和0.23mg/L。（2）流式結果表明：①單用MNP（Fe3O4）時K562和U937細胞凋亡率分別為7.1％±3.23％和6

5、.2％±1.7％，較空白對照組（6.1％±1.67％和5.03％±0.13％）差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05）；②GA單用及聯(lián)合MNP（Fe3O4）應用時K562細胞的凋亡率分別為35.2％±3.37％及48.7％±1.47％，兩組間差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；③GA單用及聯(lián)合MNP（Fe3O4）應用時U937細胞的凋亡率分別為35.05％±3.25％及54.25％±2.45％，兩組間差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。（3）小劑量

6、GA（0.6mg/L、0.2mg/L）分別聯(lián)合10mg/L MNP（Fe3O4）作用于K562和U937細胞48h后，光鏡下均可見細胞胞體固縮、核固縮、核碎裂及凋亡小體形成等典型的凋亡形態(tài)改變，熒光顯微鏡下均可見大量細胞染色質(zhì)高度濃聚并邊緣化、核碎裂、碎片狀非均質(zhì)熒光增強等凋亡細胞核熒光改變；而大劑量GA（6mg/L）單獨作用于K562和U937細胞48h后細胞呈現(xiàn)胞體高度腫脹、胞膜破裂、內(nèi)容物溶解并釋放等壞死改變。（3）MNP（Fe3

7、O4）與GA聯(lián)合作用于K562和U937細胞48h后，Bcl-2、NF-κB和Survivin mRNA和蛋白水平明顯下調(diào)，Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白水平明顯上調(diào)，與單用GA相比差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。
　　 結論（1）MNP（Fe3O4）單獨處理K562和U937細胞對細胞正常生長、明顯影響，且不能有效促進K562和U937細胞凋亡；（2）GA與MNP（Fe3O4）聯(lián)合應用后可發(fā)揮更大的細胞毒作用；（