磁性納米氧化鐵修飾的高三尖杉酯堿對(duì)白血病細(xì)胞的體內(nèi)外效應(yīng)研究.pdf

1、目的：本課題旨在探索磁性納米氧化鐵(magnetic nanoparticle of Fe3O4,MNP- Fe3O4)修飾的高三尖杉酯堿(Homoharringtonine,HHT)與傳統(tǒng)注射劑型對(duì)白血病細(xì)胞殺傷作用的體內(nèi)外效應(yīng)研究,為臨床試驗(yàn)提供重要的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：(1)應(yīng)用CCK8法分析傳統(tǒng)注射劑型HHT對(duì)白血病細(xì)胞系K562、HL-60、SHI-1、NB4的細(xì)胞毒性作用。(2)應(yīng)用光學(xué)顯微鏡及透射電鏡觀察不同

2、劑型藥物處理后NB4細(xì)胞形態(tài)特征。(3)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,FCM)分別檢測(cè)不同劑型藥物處理后NB4細(xì)胞凋亡及周期變化;甲基纖維素半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)法檢測(cè)NB4細(xì)胞集落形成能力;以transwell跨膜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)NB4細(xì)胞侵襲能力。(4)應(yīng)用蛋白免疫印跡法(Western blot,WB)檢測(cè)不同劑型藥物處理后Caspase3、PARP、Mcl-1蛋白水平變化。(5)通過(guò)裸鼠皮下成瘤模型檢測(cè)不同劑型藥物的體內(nèi)抗腫瘤

3、效應(yīng)。
　　結(jié)果：(1)CCK8結(jié)果顯示:①HHT對(duì)K562、HL-60、SHI-1、NB4增殖有明顯抑制作用,且呈現(xiàn)時(shí)間-劑量依賴性,對(duì)NB4細(xì)胞最為敏感;②不同劑型HHT作用于NB4細(xì)胞24h對(duì)其增殖抑制,在濃度區(qū)間0.015625-0.125μmol/L時(shí),HHT-MNP-Fe3O4組抑制率大于HHT組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　(2)①光鏡下觀察HHT和HHT-MNP-Fe3O4作用于NB4細(xì)胞,可見(jiàn)部

4、分細(xì)胞核固縮、核碎裂及凋亡小體形成等典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變;②透射電鏡下可見(jiàn)空白組細(xì)胞完整,胞漿內(nèi)未見(jiàn)明顯空泡形成。MNP-Fe3O4組細(xì)胞胞膜內(nèi)陷形成的囊泡內(nèi)可見(jiàn)黑色物質(zhì),HHT組大量空泡形成,胞核染色質(zhì)疏松,溶酶體腫脹變形,囊泡內(nèi)未見(jiàn)黑色物質(zhì)。HHT-MNP-Fe3O4組細(xì)胞腫脹,胞核碎裂,染色質(zhì)疏松,胞漿內(nèi)可見(jiàn)大量囊泡,其內(nèi)見(jiàn)黑色顆粒。
　　(3)流式結(jié)果表明:①濃度0.0078125μmol/L作用NB4細(xì)胞24h,HHT-

5、MNP-Fe3O4組凋亡率為18.4±1.33％,HHT組凋亡率為10.73±0.50％(P<0.05)。②周期檢測(cè)發(fā)現(xiàn)G0/G1細(xì)胞比例HHT-MNP-Fe3O4組為60.4±1.26％,HHT組為47.83±1.42％(P<0.05)。③0.0078125μmol/L的HHT及HHT-MNP-Fe3O4作用NB4細(xì)胞6h后完善集落形成實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示藥物組較空白組及MNP-Fe3O4組細(xì)胞克隆能力減弱,集落數(shù)明顯減少,HHT-MNP-

6、Fe3O4組集落數(shù)19.7±3.2,HHT組為25.9±4.3(P<0.05)。④0.0078125μmol/L的HHT及HHT-MNP-Fe3O4作用NB4細(xì)胞6h后跨transwell侵襲能力較空白組及MNP-Fe3O4組無(wú)明顯變化(P>0.05)。
　　(4)HHT-MNP-Fe3O4較HHT更易激活Caspase3、PARP蛋白,下調(diào)抗凋亡蛋白Mcl-1水平而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
　　(5)皮下成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果示:HHT-MN

7、P-Fe3O4組瘤體明顯小于HHT組,平均體積193±26mm3(457±100,P<0.05),平均重量0.67±0.03g(1.42±0.56,P<0.05),HHT-MNP-Fe3O4療效優(yōu)于注射劑型HHT。
　　結(jié)論：(1)HHT作為一種有效的抗腫瘤藥物,對(duì)白血病細(xì)胞系有殺傷作用,且抗腫瘤效應(yīng)呈現(xiàn)時(shí)間-劑量依賴性。
　　(2)在一定濃度范圍內(nèi),HHT-MNP-Fe3O4組對(duì)NB4細(xì)胞增殖的抑制作用強(qiáng)于HHT組,而低濃