白色念珠菌對(duì)人口腔黏膜上皮角質(zhì)細(xì)胞的作用研究.pdf

1、目的：
　　 白色念珠菌又稱白假絲菌,是人體的共生菌群,也是條件致病菌,主要寄生在人體的體表、口腔咽喉及腸道等部位,通常不會(huì)引起疾病。調(diào)查顯示,正常人帶菌率以口腔最高,約為80%,其次是腸道,約50%,陰道為20%～30%[1]。病原體侵入機(jī)體后能否致病取決于病原體的毒力、數(shù)量、入侵途徑與機(jī)體的適應(yīng)性、抵抗性等。目前,對(duì)于白色念珠菌感染發(fā)病機(jī)制的研究熱點(diǎn)主要集中在兩個(gè)方面:一是宿主本身的防御機(jī)制對(duì)病原菌的吞噬、殺傷作用,二是病原

2、菌對(duì)宿主的毒性作用,然而其與宿主相互作用過(guò)程中發(fā)生了哪些變化尚無(wú)定論,還需大量研究進(jìn)行闡述。國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究表明白色念珠菌的毒力主要在于其侵襲力,主要相關(guān)因素有黏附性、表型轉(zhuǎn)換、細(xì)胞外水解酶(CAP),疏水性,抗吞噬作用。白色念-珠菌粘附于宿主上皮細(xì)胞是其致病的關(guān)鍵步驟,也是首要條件。白色念珠菌的侵入將刺激上皮細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子引發(fā)炎癥反應(yīng),也可直接損傷上皮細(xì)胞,導(dǎo)致組織損傷。但關(guān)于白色念珠菌感染后上皮細(xì)胞防御反應(yīng)的具體機(jī)制還存在大量未

3、知領(lǐng)域,成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。
　　 口腔黏膜上皮角質(zhì)細(xì)胞(HOK)是口腔黏膜上皮中含量最多的細(xì)胞,也是白色念珠菌侵襲的主要靶細(xì)胞。本研究通過(guò)將不同表型與不同濃度的白色念珠菌與人口腔黏膜上皮角質(zhì)細(xì)胞混合培養(yǎng),探討影響白色念珠菌對(duì)HOK粘附作用的理化因素、白色念珠菌對(duì)HOK的毒力侵襲作用及對(duì)HOK細(xì)胞凋亡程序的影響,為深入研究口腔念珠菌病的發(fā)病機(jī)制提供佐證。
　　 材料與方法：
　　 首先進(jìn)行白色念珠菌標(biāo)準(zhǔn)菌株及H

4、OK的培養(yǎng),對(duì)白色念珠菌進(jìn)行孢子相與菌絲相的誘導(dǎo)培養(yǎng),然后將不同表型的濃度分別為103CFU/ml、104CFU/ml、105CFU/ml、106CFU/ml、107CFU/ml、108CFU/ml的白色念珠菌與HOK進(jìn)行共同培養(yǎng),,通過(guò)粘附試驗(yàn)探討影響白色念珠菌對(duì)HOK粘附作用的理化因素;采用WST-1法檢測(cè)白色念珠菌對(duì)HOK的毒性作用;利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)白色念珠菌對(duì)HOK細(xì)胞凋亡的影響。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。均

5、數(shù)比較采用t檢驗(yàn),樣本率的比較采用X2檢驗(yàn),對(duì)WST-1實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA法)并運(yùn)用SNK-q法進(jìn)行組間兩兩比較。
　　 結(jié)果：
　　 1、白色念珠菌與HOK的培養(yǎng)結(jié)果
　　 白色念珠菌YPD固體培養(yǎng)基培養(yǎng)顯示乳白色類酵母型菌落,YPD液體培養(yǎng)基培養(yǎng),可見分散的大小不一的圓形孢子,菌絲誘導(dǎo),生長(zhǎng)出較純的菌絲相白色念珠菌,可見長(zhǎng)菌絲呈管狀,長(zhǎng)出許多分枝,交織成團(tuán)。正常培養(yǎng)的HOK,為多角形扁平細(xì)

6、胞,細(xì)胞核位于中央,呈鋪路石樣生長(zhǎng)。
　　 2、白色念珠菌與HOK的粘附實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 白色念珠菌為深紫色,成簇粘附于HOK表面,且菌絲相白色念珠菌的粘附指數(shù)明顯高于孢子相;隨著白色念珠菌濃度的提高,粘附率也隨之增加,各濃度的菌絲相白色念珠菌粘附率明顯高于孢子相的,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);PH值為6～8時(shí)粘附率最高且沒有明顯變化,當(dāng)PH＜6時(shí),粘附率有明顯減小的趨勢(shì)(P＜0.05);37℃時(shí)的粘附率顯著高于25

7、℃(P＜0.05)。
　　 3、白色念珠菌對(duì)HOK的毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 細(xì)胞毒性評(píng)級(jí)顯示,在感染12小時(shí),隨著白色念珠菌濃度的增加,對(duì)HOK的細(xì)胞毒性亦增加;濃度為5×105CFU/ml的白色念珠菌感染組在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)HOK的細(xì)胞毒性均為1級(jí),其余各組均為3級(jí)。
　　 4、白色念珠菌感染后HOK細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 與對(duì)照組相比,無(wú)論是孢子相的白色念珠菌還是菌絲相的白色念珠菌,凋亡細(xì)胞的比例均明顯增加,