白色念珠菌對人口腔黏膜上皮角質細胞的作用研究.pdf

1、目的：
　　 白色念珠菌又稱白假絲菌,是人體的共生菌群,也是條件致病菌,主要寄生在人體的體表、口腔咽喉及腸道等部位,通常不會引起疾病。調查顯示,正常人帶菌率以口腔最高,約為80%,其次是腸道,約50%,陰道為20%～30%[1]。病原體侵入機體后能否致病取決于病原體的毒力、數(shù)量、入侵途徑與機體的適應性、抵抗性等。目前,對于白色念珠菌感染發(fā)病機制的研究熱點主要集中在兩個方面:一是宿主本身的防御機制對病原菌的吞噬、殺傷作用,二是病原

2、菌對宿主的毒性作用,然而其與宿主相互作用過程中發(fā)生了哪些變化尚無定論,還需大量研究進行闡述。國內(nèi)外學者研究表明白色念珠菌的毒力主要在于其侵襲力,主要相關因素有黏附性、表型轉換、細胞外水解酶(CAP),疏水性,抗吞噬作用。白色念-珠菌粘附于宿主上皮細胞是其致病的關鍵步驟,也是首要條件。白色念珠菌的侵入將刺激上皮細胞分泌多種細胞因子引發(fā)炎癥反應,也可直接損傷上皮細胞,導致組織損傷。但關于白色念珠菌感染后上皮細胞防御反應的具體機制還存在大量未

3、知領域,成為國內(nèi)外研究的熱點。
　　 口腔黏膜上皮角質細胞(HOK)是口腔黏膜上皮中含量最多的細胞,也是白色念珠菌侵襲的主要靶細胞。本研究通過將不同表型與不同濃度的白色念珠菌與人口腔黏膜上皮角質細胞混合培養(yǎng),探討影響白色念珠菌對HOK粘附作用的理化因素、白色念珠菌對HOK的毒力侵襲作用及對HOK細胞凋亡程序的影響,為深入研究口腔念珠菌病的發(fā)病機制提供佐證。
　　 材料與方法：
　　 首先進行白色念珠菌標準菌株及H

4、OK的培養(yǎng),對白色念珠菌進行孢子相與菌絲相的誘導培養(yǎng),然后將不同表型的濃度分別為103CFU/ml、104CFU/ml、105CFU/ml、106CFU/ml、107CFU/ml、108CFU/ml的白色念珠菌與HOK進行共同培養(yǎng),,通過粘附試驗探討影響白色念珠菌對HOK粘附作用的理化因素;采用WST-1法檢測白色念珠菌對HOK的毒性作用;利用流式細胞術檢測白色念珠菌對HOK細胞凋亡的影響。采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析。均

5、數(shù)比較采用t檢驗,樣本率的比較采用X2檢驗,對WST-1實驗結果進行單因素方差分析(ANOVA法)并運用SNK-q法進行組間兩兩比較。
　　 結果：
　　 1、白色念珠菌與HOK的培養(yǎng)結果
　　 白色念珠菌YPD固體培養(yǎng)基培養(yǎng)顯示乳白色類酵母型菌落,YPD液體培養(yǎng)基培養(yǎng),可見分散的大小不一的圓形孢子,菌絲誘導,生長出較純的菌絲相白色念珠菌,可見長菌絲呈管狀,長出許多分枝,交織成團。正常培養(yǎng)的HOK,為多角形扁平細

6、胞,細胞核位于中央,呈鋪路石樣生長。
　　 2、白色念珠菌與HOK的粘附實驗結果
　　 白色念珠菌為深紫色,成簇粘附于HOK表面,且菌絲相白色念珠菌的粘附指數(shù)明顯高于孢子相;隨著白色念珠菌濃度的提高,粘附率也隨之增加,各濃度的菌絲相白色念珠菌粘附率明顯高于孢子相的,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);PH值為6～8時粘附率最高且沒有明顯變化,當PH＜6時,粘附率有明顯減小的趨勢(P＜0.05);37℃時的粘附率顯著高于25

7、℃(P＜0.05)。
　　 3、白色念珠菌對HOK的毒性實驗結果
　　 細胞毒性評級顯示,在感染12小時,隨著白色念珠菌濃度的增加,對HOK的細胞毒性亦增加;濃度為5×105CFU/ml的白色念珠菌感染組在不同時間點對HOK的細胞毒性均為1級,其余各組均為3級。
　　 4、白色念珠菌感染后HOK細胞凋亡實驗結果
　　 與對照組相比,無論是孢子相的白色念珠菌還是菌絲相的白色念珠菌,凋亡細胞的比例均明顯增加,