自制殼聚糖-酵母多糖微球抗白色念珠菌的研究.pdf

1、目的:探索殼聚糖和酵母多糖對白色念珠菌的作用，并以殼聚糖和酵母多糖為原料制備微球，考察殼聚糖-酵母多糖微球?qū)Υ笫蟀咨钪榫窝椎寞熜А?br>　　方法:
　　1.采用XTT減低法評價殼聚糖對96孔培養(yǎng)板內(nèi)白色念珠菌生物膜的生長階段活性的影響。以熒光顯微鏡、掃描電鏡觀察殼聚糖對生物膜內(nèi)死活菌和形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響。不同濃度的酵母多糖注射于大鼠體內(nèi)，提取所有大鼠肺組織內(nèi)總RNA并利用PCR技術(shù)檢測Dectin-1(Dentritic cel

2、l-associated C-type lectin-1)的表達。
　　2.采用乳化交聯(lián)法，對藥物比、油水比、攪拌速度、交聯(lián)劑、交聯(lián)時間幾項因素進行分析，選出優(yōu)于制備微球的條件。通過掃描電鏡和紅外光譜對所制微球性質(zhì)和表面形態(tài)進行分析。
　　3.建立免疫低下大鼠肺部感染白色念珠菌模型，隨機分組為模型組、殼聚糖組、聯(lián)合用藥組和微球組。分別給予相應(yīng)藥物治療后，HE染色觀察各組大鼠肺組織病理變化。Real-time PCR檢測Dec

3、tin-1、TLR2（Toll-like receptor2）mRNA的表達，ELISA檢測IL-10、TNF-α水平。
　　結(jié)果:
　　1.0.0313％殼聚糖對白色念珠菌浮游菌和早期生物膜有明顯的抑制作用。隨著生物膜的成熟，0.0625％殼聚糖才能夠顯著地抑制生物膜生長。通過熒光顯微鏡和掃描顯微鏡下觀察0.0625％殼聚糖能有效殺死生物膜內(nèi)菌體并延緩生物膜形成。低中高濃度的酵母多糖能上調(diào)大鼠體內(nèi)Dectin-1的表達，但

4、高濃度酵母多糖可能引起全身炎癥反應(yīng)。
　　2.用乳化交聯(lián)法制備微球操作簡單且穩(wěn)定。在藥物比為3∶2，油水比為8∶1，攪拌速度為600rpm，以戊二醛飽和的甲苯溶液作為交聯(lián)劑條件下，所制微球通過電鏡觀察表面成球型，分散性好，大小基本均勻，紅外光譜證實殼聚糖-酵母多糖微球內(nèi)殼聚糖和酵母多糖交聯(lián)成功。
　　3.自制殼聚糖-酵母多糖微球應(yīng)用于感染白色念珠菌肺炎的大鼠體內(nèi)，殼聚糖-酵母多糖微球組肺組織炎癥明顯減輕，且體內(nèi)Dectin-

5、1、TLR2、IL-10水平明顯較模型組和殼聚糖組升高。而殼聚糖-酵母多糖微球組體內(nèi)TNF-α水平明顯較模型組降低。
　　結(jié)論:
　　1.殼聚糖具有殺滅白色念珠菌和抑制起生物膜形成的作用。酵母多糖對大鼠體內(nèi)Dectin-1具有上調(diào)作用。
　　2.乳化交聯(lián)法制備微球工藝簡單。經(jīng)過優(yōu)化后工藝穩(wěn)定適合制備微球。
　　3.殼聚糖酵母多糖微球能顯著提高感染白色念珠菌肺炎的大鼠體內(nèi)Dectin-1、TLR2表達，促進IL-1