消炎痛抑制白色念珠菌菌絲形成的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、白色念珠菌是一種寄生于正常人體粘膜表面的條件致病真菌，具有兩態(tài)性，近來(lái)研究證實(shí)，白色念珠菌的形態(tài)轉(zhuǎn)換過(guò)程與其致病性密切相關(guān)，菌絲不僅對(duì)宿主粘膜有更強(qiáng)的粘附和侵入能力，而且還有助于其逃逸人體免疫系統(tǒng)的攻擊。體外實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)許多環(huán)境因子可以通過(guò)不同的或共同的通路誘導(dǎo)菌絲形成，在誘導(dǎo)菌絲形成的環(huán)境下，尋求抑制菌絲形成的藥物將是今后研究抗念珠菌藥物的熱點(diǎn)。 本研究通過(guò)在體外構(gòu)建誘導(dǎo)白色念珠菌菌絲形成的兩種條件及運(yùn)用乳酸酚棉藍(lán)染色和結(jié)晶紫

2、芽管檢測(cè)法分別從形態(tài)上觀察和定量分析加入消炎痛和PGE2對(duì)菌絲形成的影響，為局部應(yīng)用消炎痛治療白念珠菌陰道炎提供可行性依據(jù)。全文分三部分簡(jiǎn)述如下： 第一部分白色念珠菌菌絲形成的條件及菌絲的定量分析方法 本部分采用含10％小牛血清的RPMI1640液體培養(yǎng)基和玉米粉-吐溫80固體培養(yǎng)基誘導(dǎo)白色念珠菌菌絲形成，用乳酸酚棉藍(lán)染色從形態(tài)學(xué)觀察菌絲形成情況，用結(jié)晶紫芽管檢測(cè)法定量分析菌絲形成情況。結(jié)果表明，在含10％小牛血清的RP

3、MI1640液體培養(yǎng)基中可見(jiàn)成團(tuán)的菌絲形成，結(jié)晶紫芽管檢測(cè)法能定量分析白色念珠菌菌絲生長(zhǎng)狀況；在玉米粉-吐溫80固體培養(yǎng)基中可見(jiàn)厚壁孢子及假菌絲形成。 第二部分PGE2誘導(dǎo)菌絲形成及其抗PGE2抗體的阻遏作用 本部分采用結(jié)晶紫芽管檢測(cè)法定量分析在含10％小牛血清和不含小牛血清的RPMI1640液體培養(yǎng)基中加入外源性PGE2后菌絲形成的情況，以及同時(shí)加入抗PGE2抗體后菌絲形成情況。結(jié)果表明，PGE2可促進(jìn)菌絲形成，加入3

4、00pg/mlPGE2其促進(jìn)菌絲形成的作用與含10％血清的作用相當(dāng)，而同時(shí)加入抗PGE2抗體有阻遏PGE2的作用，相對(duì)菌絲形成率下降40％。有意義的是在不含PGE2的血清誘導(dǎo)的培養(yǎng)基中同時(shí)加入抗PGE2抗體，也有阻遏血清因子誘導(dǎo)菌絲形成的作用，相對(duì)菌絲形成率下降42％，這就提示血清中菌絲生長(zhǎng)誘導(dǎo)因子之一可能為前列腺素。 第三部分消炎痛對(duì)白色念珠菌菌絲形成的影響及其機(jī)制探討 實(shí)驗(yàn)一在液體培養(yǎng)基中消炎痛對(duì)菌絲形成的影響

5、 本實(shí)驗(yàn)主要研究在含10％小牛血清的RPMI1640液體培養(yǎng)基中同時(shí)加入不同濃度消炎痛后，分別在2.5h后和4h后在顯微鏡下(x400)觀察三株白色念珠菌芽管、菌絲形成情況，并用結(jié)晶紫芽管檢測(cè)法定量分析菌絲形成的百分率。結(jié)果表明消炎痛對(duì)白色念珠菌芽管和菌絲形成的抑制作用與劑量相關(guān)：消炎痛濃度為0.75mM時(shí)可抑制50％芽管形成，濃度為2.0mM時(shí)可完全抑制芽管和菌絲形成。 實(shí)驗(yàn)二在厚壁孢子試驗(yàn)中消炎痛對(duì)菌絲形成的影響

6、本實(shí)驗(yàn)主要研究在玉米-吐溫80固體培養(yǎng)基中同時(shí)加入不同濃度消炎痛后，25℃培養(yǎng)48h后于顯微鏡下(x400)觀察白色念珠菌頂端厚壁孢子及假菌絲形成情況。結(jié)果表明消炎痛濃度為1.0mM時(shí)可抑制假菌絲和厚壁孢子的形成，濃度為2.0mM時(shí)，幾乎沒(méi)有假菌絲形成。 實(shí)驗(yàn)三在外源性PGE2存在時(shí)消炎痛對(duì)菌絲形成的影響 本實(shí)驗(yàn)主要研究在RPMI1640培養(yǎng)基中同時(shí)加入外源性PGE2(300pg/ml)和消炎痛(2.0mM)，培養(yǎng)4h后

7、用結(jié)晶紫芽管檢測(cè)法定量分析消炎痛對(duì)菌絲形成的影響，以期能進(jìn)一步說(shuō)明消炎痛抑制菌絲形成的作用機(jī)制。結(jié)果表明在外源性PGE2存在的情況下，消炎痛仍能抑制菌絲形成。 小結(jié) 上述三部分的實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，消炎痛在含10％血清的RPMI1640培養(yǎng)基(菌絲形成的cAMP-Efg1通路)和玉米粉-吐溫80固體培養(yǎng)基(菌絲形成的CZF1通路)中均可抑制白色念珠菌菌絲形成，而且在有外源性PGE2存在的條件下，消炎痛仍可抑制白色念珠菌菌絲形成